プロラクチン遺伝子発現を増幅する新規転写因子mPOUの生理的病理的意義

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671085
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 置村 康彦 神戸大学, 医学部, 助教授 (30204100)
• キーワード: プロラクチン / 下垂体 / 転写因子 / mPOU / 下垂体腫瘍

研究概要

私どもは、プロラクチン(PRL)遺伝子5'上流配列のPit-1結合DNAエレメントの結合する新規転写因子mPOUをクローニングしたが、このmPOUの生理的病理的意義を明らかにするため以下の検討を行なった。
種々のレポーター遺伝子を使用した一過性発現実験系で、Pit-1によって発現が制御される遺伝子のうち、PRL遺伝子に対しては、mPOUはPit-1と相乗的に発現を活性化することがわかった。成長ホルモン(GH)遺伝子に対しては、mPOUとPit-1は相加的に活性化した。いっぽう、GH-releasing hormone受容体遺伝子に対しては、明確な作用を示さなかった。
mPOUとPit-1はヘテロダイマー形成する証拠はなく、PRL遺伝子に対するmPOUおよびPit-1の相乗効果の機構は不明である。また、Pit-1の標的遺伝子に対してもmPOUの効果が異なるが、その機構も現在のところ不明である。
mPOUの一部のアミノ酸配列とヘモシアニンをコンジュゲートさせた後、家兎に免疫し、抗mPOU抗血清を得た。これを用いて、ヒト下垂体腺腫にmPOUが存在するか検討した。PRLおよびGH産生腺腫ではmPOU様免疫活性が核内に存在した。一方、非機能性腺腫、FSH産生腺腫ではmPOU様免疫活性が検出できなかった。この成績とmPOUはPRL。GH遺伝子発現を促進するという一過性発現系での成績を総合すると、mPOUは下垂体PRL, GH産生細胞においてPRL、GH遺伝子発現を促進する方向に作用しているものと考えられる。
mPOUの生理的意義を明確にするため、mPOU遺伝子をGFPcDNAで置換させるGFPノックインターゲテイングベクターを作製している。GFPがmPOUに置き換わったノックアウトマウスを用いることにより、mPOUの生理的意義だけでなく、mPOUの時間的空間的発現様式も容易に検討できるものと考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Murata M: "Ghrelin modulates the downstream molecules of insulin signaling in hepatoma cells"J Biol Chem. 277. 5667-5674 (2002)
• [文献書誌] Murata M: "Dual action of eicosapentaenoic acid in hepatoma cells. Upregulation of metabolic action of insulin and inhibition of cell proliferation"J Biol Chem. 276. 31422-31428 (2001)
• [文献書誌] Kaji H: "Hormonal regulation of the human ghrelin reartor gene transcription"Biochem Biophys Res Commun. 286. 660-666 (2001)
• [文献書誌] Kaji H: "Bone metabolism and body composition in Japanese patients with active acromegaly"Clin Endo crinol (oxf). 55. 175-181 (2001)
• [文献書誌] Mizuno I: "Upregulation of the Klotho gene expression by thyroid hormone and during adipose differentiation"Life Sciences. 68. 2917-2923 (2001)
• [文献書誌] Kishimoto M: "Cloning and characterization of the 5'-flanking region of the human prolactin releasing peptide receptor gene"Biochem Biophys Res Commun. 276. 411-416 (2000)
• [文献書誌] Kishimoto M: "Multiple fibrosclerosis as a possible cause of pamhyropituitarism with central diabetes insipidus"Endocrine J. 47. 235-342 (2000)
• [文献書誌] Murata M: "Stimulation by eicosapentaenoie acids of leptin mRNA expression and its secretion in mouse 3T3-LI adipocytes in ritro"Biochem Biophys Res Commun. 270. 343-348 (2000)