細胞コレステロール搬出メカニズムの分子生物学的な解析〜アポリポタンパク質レセプターの同定cDNAクローニングと機能の解析〜

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671120
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 堂前 純子 名古屋市立大学, 医学部, 講師 (70227700)
• 研究分担者: 横山 信治 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (10142192)
• キーワード: apolipoprotein / cholesterol / ABCAl

研究概要

細胞コレステロール搬出にかかわるアポリポタンパク質レセプターの同定と解析のため、各種の細胞株を用いてアポAIの結合に伴うコレステローとリン脂質の放出を調べ、以下の成果を得た。
1)RAW264にはdBcAMP処理により、無処理細胞で認められなかった特異的なアポAI結合部位とアポAI依存性にコレステロールとリン脂質を含むHDL形成が出現した。これには新たなRNAと蛋白質の合成が必要であった。
2)ABCAl mRNAとタンパク質は無処理RAW264でも検出されたが、dBcAMP刺激で約10倍に増加した。
3)各種薬物のABCAl陰イオン輸送阻害能は、RAW264でアポAI依存性HDL生成反応へ及ぼす効果と必ずしも一致しなかった。
4)無処理THP-1はアポAI依存性にHDLを生成するが、これにはリン脂質のみが含まれていた。PMA処理後の細胞からは、コレステロールとリン脂質を含むHDLが生成された。
5)ABCAl mRNAとタンパク質は無処理THP-1にはほとんど検出されなかったが、PMAで発現が誘導された。
6)アポAI依存性HDL形成のない293由来のABCAl導入株のうち、低発現株ではリン脂質のみ、高発現株ではコレステロールとリン脂質の放出が認められた。
以上より、RAW264細胞にはAキナーゼで転写の活性化されるアポAI結合タンパク質が存在し、アポAI依存性HDL新生をもたらすと考えられた。ABCAlはこの過程に必要と考えられたが、得られた実験結果からは他の因子の関与も否定できない。アポAI依存性HDL生成反応が生じるか否か、HDLにコレステロールが含まれるか否かには、単にABCAl発現の有無だけではなく、発現の程度、細胞の種類や状態等多数の因子の関与が推定される。

研究成果

• [文献書誌] Jin-ichi Ito and Shinji Yokoyama.: "Sialosylcholesterol induces reorganization of astrocyte filament network."Biochim.Biophys.Acta. 1495. 195-202 (2000)
• [文献書誌] Jin-ichi Ito, et al: "Cholesterol-sphingomyelin interaction in membrane and apolipoprotein-mediated cellular cholesterol efflux."J.Lipid Res.. 41. 894-904 (2000)
• [文献書誌] Maki Tsujita, et al: "Apolipoprotein-mediated cellular cholesterol/phospholipid efflux and plasma high density lipoprotein level in mice."Biochim.Biophys.Acta. 1485. 199-213 (2000)
• [文献書誌] Koon K.Teo, et al.: "Montague on behalf of the SCAT invesligators. Long term effects of cholesterol lowering and angiotensin-converting enzyme inhibition on coronary atherosclerosis : The Simvastatin/Enalapril Coronary Atherosclerosis Trial(SCAT)."Circulation. 102. 1748-1754 (2000)
• [文献書誌] Sumiko Abe-Dohmae, et al.: "Characterlzation of apolipoprotien-mediated HDL generation induced by cAMP in a murine macrophage cell line."Biochemistry. 39. 11092-11099 (2000)
• [文献書誌] Reijiro Arakawa, et al: "Involvement of caveolin-1 in cholesterol-enrichment of HDL during its assembly by apolipoprotein and THP-1 cells."J.Lipid Res.. 41. 1952-1962 (2000)
• [文献書誌] Shogo Suzuki, et al: "Enhancement of the cAMP-induced apolipoprotein A-I-mediated cellular lipid release by calmodulin inhibitors W7 and W5 from RAW264 mouse macrophage cell line cells."J.Cardiovasc.Pharmacol.. 36. 609-616 (2000)
• [文献書誌] Shinji Yokoyama.: "Release of cellular cholesterol : Molecular mechanism for cholesterol homeostasis in cells and in the body."Biochim.Biophys.Acta. 1529. 231-244 (2000)
• [文献書誌] Li-Yong Zhang,Jin-ichi Ito,Taiji Kato and Shinji Yokoyama.: "Cholesterol homeostasis in rat astrocytoma cells GA-1."J.Biochem.. 128. 837-845 (2000)
• [文献書誌] Shigehiro Tomimoto, et al: "Effect of probucol in lecithin-cholesterol acyltransferase deficient mice : Inhibition of two independent cellular cholesterol releasing pathways in vivo."Arterioscler. Thromb. Vasc.Biol.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Akitomo Goto, et al: "Cholesteryl ester transfer protein and atherosclerosis in Japanese subjects : A study based on coronary angiography."Atheroscelrosis. (in press). (2001)