細胞コレステロール搬出メカニズムの分子生物学的な解析〜アポリポタンパク質レセプターの同定、eDNAクローニングと機能の解析〜

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671120
• 研究機関: 名古屋市立大学
• 研究代表者: 堂前 純子 名古屋市立大学, 医学部, 講師 (70227700)
• 研究分担者: 横山 信治 名古屋市立大学, 医学部, 教授 (10142192)
• キーワード: HDL / コレステロール / ABCA1 / アポリポタンパク質

研究概要

細胞コレステロール搬出にかかわるアポリポタンパク質レセプターの同定と解析のため、各種細胞株を用いた実験を行い、以下の成果を得た。
1)RAW264にはdBcAMP投与に伴い、新たなRNAと蛋白質の合成を経て特異的なアポAI結合部位とアポAI依存性のコレステロールとリン脂質を含むHDL形成を認めた。ABCA1mRNAとタンパク質は無処理細胞でも検出されたが、dBcAMPで約10倍に増加した。各種薬物のABCA1陰イオン輸送阻害能は、アポA1依存性HDL生成反応へ及ぼす効果と必ずしも一致しなかった。
2)THP-1はアポAI依存性にリン脂質のみを含むHDLを生成するが、PMA処理後には、コレステロールとリン脂質を含むHDLが生成された。ABCA1mRNAとタンパク質は無処理THP-1にはほとんど検出されず、PMAで発現が誘導された。
3)アポAI依存性HDL形成のない293由来のABCA1導入株のうち、低発現株ではリン脂質のみ、高発現株ではコレステロールとリン脂質の放出が認められた。特異的なアポAI結合は293には見られなかったが、ABCA1導入株には低発現株と高発現株の両方で検出された。
4)Tangier病患者で報告されたものを含む各種変異を導入したABCA1cDNAを293に一過性に発現させると、野生型ABCA1に比べアポAI依存性コレステロール放出は減少したが、リン脂質放出の減少は一様ではなかった。
以上より、RAW264にはAキナーゼで転写の活性化されるアポAI結合タンパク質が存在し、アポAI依存性HDL新生をもたらすと考えられた。ABCA1はこの過程に必要と考えられたが、得られた実験結果からは他の因子の関与も否定できない。HDL生成ならびにHDLへのコレステロール組み込みの有無には、ABCA1の構造、発現の程度や分布、細胞の状態等多数の因子の関与するものと推定される。

研究成果

• [文献書誌] Tanaka AR, et al.: "Human ABCA1 contains a larage amino-terminal extracellular domain homologous to an epitope of Sjogren's syndrome"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 283. 1019-1025 (2001)
• [文献書誌] Kojima K, et al.: "Progesterone inhibits apolipoprotein-mediated cellular lipid release : a putative mechanism for the decrease of high-density lipoprotein"Biochim. Biophys. Acta. 1532. 173-184 (2001)
• [文献書誌] Abe-Dohmae S, et al.: "Characterization of apolipoprotein-mediated HDL generation induced by cAMP in a murine macrophage cell line"Biochemistry. 39. 11092-11099 (2000)
• [文献書誌] Arakawa R, et al.: "Involvement of caveolin-1 in cholesterol-enrichment of HDL during its assembly by apolipoprotein and THP-1 cells"J. Lipid Res.. 41. 1952-1962 (2000)
• [文献書誌] Suzuki S, et al.: "Enhancement of the cAMP-induced apolipoprotein A-I-mediated cellular lipid release by calmodulin inhibitors W7 and W5 from RAW264 mouse macrophage cell line cells"J. Cardiovase. Pharmacol.. 36. 609-616 (2000)