抗原提示能増強及びTh1タイプサイトカイン遺伝子導入樹状細胞を用いた消化器癌治療

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671198
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 軍司 祥雄 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (60241957)
• 研究分担者: 島田 英昭 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (20292691) ; 松原 久裕 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (20282486) ; 落合 武徳 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (80114255) ; 田川 雅敏 千葉県がんセンター, 病理研究部, 部長 (20171572)
• キーワード: 樹状細胞 / アデノウイルスベクター / Th1タイプサイトカイン / Colon 26

研究概要

1.ヒトIL-2遺伝子を組み込んだアデノウイルスベクターAxCAhIL-2を用いてマウス結腸癌細胞colon26にヒトIL-2遺伝子を導入し、培養上清中のIL-2産生能を検討すると、MOIの増加に比例してIL-2の産生量が増加した。
2.M.O.I.30でAxCAhIL-2を感染させたcolon26のin vitroでの増殖は、親株との増殖に差異は見られなかったが、Balb/Cマウス皮下にIL-2産生量のlow titerおよび、high titerのAxCAhIL-2を遺伝子導入したcolon26を局注すると有意に腫瘍増殖が抑制された。しかし、retrovirus vectorで腫瘍細胞内にIL-2遺伝子を組み込んだ場合にみられたような腫瘍の完全退縮は見られなかった。
3.recombinantマウスIL-4およびGM-CSF(1000u/ml)を用いてBalb/cおよびヌウードマウスの骨髄より樹状細胞を誘導した。樹状細胞にAxCAhIL-2を2時間感染させて、ヒトIL-2遺伝子の遺伝子導入を試み、上清中にIL-2の産生を確認した。
4.colon26のin vivo皮下腫瘍モデルを作成し、感染樹状細胞(DC/AxCAhIL-2)を腫瘍内へ局注すると、樹状細胞単独またはIL-2産生量がlow titerのAxCAhIL-2感染DC局注群では腫瘍増殖抑制は見られなかったが、high titerのDC/AxCAhIL-2局注群では有意に腫瘍増殖の抑制がみられた。また、これらのマウスの生存曲線をKaplan-Myer法にて計測し比較すると有意に、樹状細胞局注群の生存日数が延長した(p<0.001)。腫瘍内には、多くのマクロファージとリンパ球が浸潤していた。
5.high titerの感染樹状細胞DC/AxCAhIL-2をDay0, Day2, Day10の3回にわたり腫瘍内に局注すると腫瘍増殖は著明に抑制されたが、担癌マウスは腫瘍増殖を認めないにもかかわらず死亡した。
6.Colon26細胞のtumor lysateをAxCAhIL-2/DCにpulseしてBalb/cマウスの腹腔内および静脈内に前投与したが、colon26の皮下腫瘍増殖抑制は見られず、前感作が成立しなかった。
7.Th1タイプサイトカイン遺伝子を導入した樹状細胞の腫瘍抑制効果を臨床に即した形で検討する目的で、胃癌の血行性肝転移モデルをBalb/cマウスを用いて作成し報告した。
アデノウイルスを用いた樹状細胞へのIL-2遺伝子導入と樹状細胞の腫瘍内局注は樹状細胞による抗原提示とともにTh1タイプのサイトカインが作動することにより、抗腫瘍効果が期待できる。

研究成果

• [文献書誌] Gnji, Y et al.: "Gene therapy for cancer"Surgery today. 30. 967-973 (2000)
• [文献書誌] Shimada, H, Matsubara, Y, Gunji, Y, et al.: "Gene Therapy for esophageal cancer"Res.Adv.In cancer. 2. 45-52 (2002)
• [文献書誌] Gunji, Y et al.: "Analysis of the experimental liver metastasis from inoculated tumor in the mouse stomach cavity"Surgery today. (In press). (2002)
• [文献書誌] Matsubara, H, Gunji Y, et al.: "Electorporation-mediated transfer of cytokine genes into human esophageal tumors produced anti-tumor effects in mice"Anticancer Research. 21. 2501-2504 (2001)
• [文献書誌] Gunji, Y et al.: "Antitumor effect of bone marrow-derived dendritic cells engineered to produce interleukin-2 by adenoviral vector"Molecular therapy. 1. S269-S270 (2000)
• [文献書誌] Gunji, Y et al.: "Effect of intratumoral injection of dendritic cells transduced with IL-2"Cancer gene therapy. 7. S27-S27 (2000)