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癌細胞は染色体不安定性を示すことが知られているが、その原因として、有糸分裂の際に娘染色体が等分に分離しないことが示唆されている。最近、染色体分離に関与するタンパク質や遺伝子が数多く報告され、その機能についても解明されつつある。染色体分離に関係する遺伝子の一つであるMAD2(mitotic arrest defective 2)遺伝子は、紡錘糸と染色体セントロメアの結合に重要な役割を果たしているとされ、これまでの報告では、MAD2遺伝子異常ではなくMAD2タンパク質発現低下が大腸癌細胞における染色体不安定性に関係していることが示された。今年度は、昨年度実施したMAD2プロモーター領域のクローニングと塩基配列の結果を用いて、プロモーターでの一塩基多型(SNP)の同定と、遺伝子発現に及ぼす影響をレポーターアッセイにより調べた。第一コドンから約2kb上流までのプロモーター領域の塩基配列を基にPCRプライマーを合成し、各種癌細胞DNAを鋳型にしてPCRを実施し、SNPの有無を確認した。検出されたプロモーターSNPを含むPCR産物をルシフェラーゼレポータープラズミドに組み込んだ後、常法に従いプロモーター活性を定量した。これらのSNPsはMAD2発現に有意な影響を及ぼさなかった。従って、MAD2発現低下に関与する他の機序の検討が必要と考えられる。
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