| 研究課題/領域番号 |
12671278
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
臼井 規朗 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30273626)
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| 研究分担者 |
窪田 昭男 大阪府母子保健総合医療センター, 小児外科, 部長 (10161671)
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| キーワード | 腸管上皮内リンパ球 / 腸管免疫 / 腸管粘膜透過性 / CaCo-2 / co-culture / 上皮間電気抵抗 |
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| 研究概要 |
Caco-2細胞株の継体培養を継続し、直径6.5mmの2-chamber systemにおいて、3μm孔のフィルターの裏面に3×10^5個のCaco-2細胞を播種して、2〜3週間培養を行うことにより、分化発育したCaco-2細胞単層培養のTight junctionが完成し、上皮間電気抵抗(TEER)が400-600Ω・cm2程度に上昇して安定した。
Tight junctionが完成した2〜3週間目に、SDラットより腸管関連リンパ球(GALT=Gut Asscciated Lymphoid Tissue)を採取して、基底膜側よりCaco-2単層培養細胞に添加した。GALTとしては、パイエル板より採取したPPL、および粘膜上皮内から採取したIELを用いた。GALT採取前にラットに全く炎症性の刺激を与えなかった場合には、3日間のco-cultureによってもTEERは全く変化しないことが明らかとなった。
次に炎症性腸疾患の動物モデルの一つであるインドメタシン投与ラットから採取した腸管のGALTを用いて実験を行った。予備的実験によりインドメタシン投与量を7.5mg/kg皮下注×2日間投与とした。この投与量では80%の頻度で、腸管が菲薄化、脆弱化して粘膜の炎症を来した腸炎モデルが作成されたが、同腸管より採取したGALT、すなわちPPLおよびIELをCaco-2単層培養細胞と3日間co-cultureしてもTEERの有意な変化は観察されなかったことから、炎症性腸疾患モデルのGALTがCaco-2腸管上皮細胞のTight junctionの機能を表すTEERには影響を及ぼさないことが明らかとなった。
次に移植免疫領域において小腸グラフトの拒絶反応として生じる腸管炎症の機序として働いていると報告されている抗CD3抗体のリンパ球刺激をラットより採取したGALTに与えた上で、Caco-2細胞の単層培養とco-cultureを行った。抗CD3抗体の量、培養期間を変化させたが、現在のところ、これによるCaco-2細胞のTEERの変化はなく、腸管粘膜透過性に及ぼす影響は観察されていない。
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