| 研究課題/領域番号 |
12671404
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| 研究機関 | 信州大学 |
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研究代表者 |
五明 広樹 信州大学, 医学部, 助手 (70311694)
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| 研究分担者 |
清水 富永 信州大学, 医学部・附属病院, 助手 (40283270)
高岡 邦夫 信州大学, 医学部, 教授 (30112048)
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| キーワード | 骨軟部肉腫 / 遺伝子 / 発現解析 / 整形外科 |
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| 研究概要 |
1、培養細胞と患者凍結サンプルからのRNAの抽出と精製……液体窒素で組織を凍結し、『クライオプレス』で組織を粉砕した。塩酸グアニジン法を用い、巨細胞腫3例、骨肉腫4例(1例は骨巨細胞腫の骨肉腫の悪性転化例1例)、MFH5例、BFH1例、平滑筋肉腫1例、脂肪肉腫4例、脂肪腫1例 滑膜肉腫3例、神経鞘腫7例、悪性神経鞘腫1例、からRNAの抽出を行った。mRNAへの精製はオリゴ(dT)セルローススピンカラムを利用して行った。
2、遺伝子発現解析……CLONTECH社製『Atlas TM Human cDNA Expression Array』を用いたハイブリダイゼイションによって発現解析を行った。1回の解析で111? 1176遺伝子の解析が可能である。凍結組織または培養細胞から抽出し精製したmRNA 1ugを[α^<32>P]dATPまたは[α^<33>P]dATPで35uCi/sampleでラベリングした。ラベリング後Atlas TM Human cDNA Expression Array membraneとハイブリダイゼイションを行い至適温度、至適塩濃度でwashing後イメージングプレートとBAS2000を用い発現解析を行う。各種肉腫での遺伝子発現パターン、悪性化前後での発現パターンは解析中である。発現解析には現有のsoftware CLONTECH社製『Atlas Image 1.5』と『AtrasNavigator 1.0』を用いている。現在まで、骨肉腫2症例、5検体(1例は骨巨細胞腫の骨肉腫の悪性転化例1例)、MFH6例、BFH1例、平滑筋肉腫1例、脂肪肉腫4例 滑膜肉腫3例、神経鞘腫7例、悪性神経鞘腫1例の発現解析を行っている。現在Northern解析で発現量の確認解析を行い、再現性をみる確認実験を行っている。
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