2001 年度研究成果報告書概要

ラット脊髄への変異型NMDA受容体遺伝子導入による神経因性疼痛の治療

研究課題

研究課題/領域番号	12671482
研究種目	基盤研究(C)
配分区分	補助金
応募区分	一般
研究分野	麻酔・蘇生学
研究機関	宮崎医科大学
研究代表者	鈴木宣彰宮崎医科大学, 医学部, 助手 (40206511)
研究分担者	中村禎志宮崎医科大学, 医学部, 助手 (60217859)
研究期間 (年度)	2000 – 2001
キーワード	NMDA受容体 / δ受容体 / Adenyl cyclase supersensitivity / 変異型NMDA受容体遺伝子
研究概要	ラット脊髄への変異型NMDA受容体遺伝子導入の予備実験として、麻薬に対す耐性発現と関連あると考えられている、オピオイド受容体を有する培養細胞を、オピオイド受容体アゴニストで慢性処理した後に観察されるAdenyl cyclase supersensitivity(forskolin刺激に対するcAMP産生量の増加)を変異型NMDA受容体遺伝子導入によって、抑制できるかどうかを調べる実験を計画した。対象とする細胞として、δ受容体とNMDA受容体の両方を有するNG108-15細胞を培養した。遺伝子導入を行うために、NMDA受容体の基本サブユニットのcDNAであるNR1 cDNAのN末端がら616番目のアスパラギンのコドンAACをアルギニンのコドンCGC変換した遺伝子(N616R cDNA)と、もう一つのNMDA受容体サブユニットのcDNAであるNR2A cDNAをpcDNA3.1ベクターに組み込んだ。シークエンスにより、N616R cDNAおよびNR2A cDNAが正しくpcDNA3.1ベクターに組み込まれたことを確認した。まず、遺伝子導入を行っていないNG108-15細胞を用い、δ受容体アゴニストであるDPDPE lOnMで4〜12時問の処理を行ったのち、forskolin 10μMさ10分間刺激し、cAMP産生量を測定した。Forskolin刺激によってcAMPの産生増加が見られたが、forskolinn刺激時のcAMP産生量はDPDPE前処置によって変化しなかった。 N616R cDNAとNR2A cDNAを同時にNG108-15細胞に導入の効果を評価するための、実験系を確立するためにさらに検討を必要とする。