新しいステロイド・Xenobiotics代謝調節機構の解明

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671601
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 増山 寿 岡山大学, 医学部・附属病院, 助手 (30314678)
• 研究分担者: 水谷 靖司 岡山大学, 医学部・附属病院, 助手 (20294465) ; 平松 祐司 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (80218817)
• キーワード: pregnane X receptor / cytochrome P450 / steroidogenesis / 核内レセプター / xenobiotics / degradation / SUG1

研究概要

核内受容体の多くは蛋白分解酵素Proteasomeを介して分解されていると考えられている。我々は,以前より内分泌撹乱物質(EDC)の作用機序としてERなどの核内受容体を介した直接的作用の他に,Pregnane X Receptor(PXR)を介してステロイド代謝酵素の発現に影響を与える間接的作用の可能性を報告してきた.その中で,PXRがligandであるProgesterone(P)の存在下で蛋白分解酵素Proteasomeの構成因子であるsuppressor for gal1(SUG1)と結合することを示してきた.
今年度は,EDCのProteasomeを介したPregnane X Receptorturnoverに及ぼす影響を検討した.まずyeast two-hybrid法にてPXRを介した転写を誘導する様々なligandの存在下でのSUG1とPXRの結合能を諦べたところ,Pの存在下でPXRはSUG1と濃度依存性に結合したが、EDCは影響を与えなかった.次にPXR発現細胞であるHEC-1を用いてProteasome Inhibltorを投与しPXR蛋白発現の変化を検討したと ろ,Proteasome InhibitorによりPXR蛋白分解は阻害された.cycloheximideにより蛋白合成を阻害し様々なligand存在下でPXR turnoverへの影響を検討したところ,PXR-SUG1結合を誘導しないEDCの存在下ではPXR turnoverは抑制された.更にlipofection法にてPXR及びSUG1発現vectorとreporter vectoをCOS-7 cellに発現し,ステロイドやEDCを投与し転写活性を測定したところ,SUG1はPXRを介した転写誘導を抑制したが,この効果はEDC投与時には認められなかった.以上よりPXRも他の核内受容体同様にProteasomeによりturnoverは制御されていると考えられた.EDCは,PXR-SUG1結合を誘導せず,PXR蛋白分解を阻害したことから,EDCはPXRのupregulationを介して内分泌機能へ影響を及ぼしている可能性が示唆された.

研究成果

• [文献書誌] H.Masuyama, Y.Hiramatsu, T.Kudo, et al.: "Endocrine Disrupting Chemicals Phthalic Acid and Nonylphenol Activate Pregnane X Receptor-mediated Transcription"Molecular Endocrinology. 14. 421-428 (2000)
• [文献書誌] Y.Hiramatsu, H.Masuyama, T.Kudo, et al.: "Streptozotocin-induced Diabetic Pregnant Rats Exhibit the Signs and Symptoms Mimicking Preeclampsia"Metabolism. 49. 853-857 (2000)
• [文献書誌] 増山 寿, 工藤尚文: "新しい核内受容体であるPregnane X rcceptorの妊娠中及び内分泌攪乱作用における役割"生活と環境. 46. 43-48 (2001)
• [文献書誌] H.Masuyama, Y.Hiramatsu, T.Kudo, et al.: "The Expression of pregnane X receptor and its target gene, cytochrome P450 3A1, in Perinatal Mouse"Molecular and Cellular Endocrinology. 172. 47-56 (2001)
• [文献書誌] 増山 寿, 平松祐司, 工藤尚文: "プロゲステロン-最近の話題-新しい核内受容体Pregnane X Receptor(PXR)"Hormone Frontier in Gynecology. 8. 365-372 (2001)
• [文献書誌] Hisashi Masuyama, Hideshi Inoshita, Yuji Hiramatsu, Takafumi Kudo: "Ligands have various potential effects on the degradation of pregnane X receptor by proteasome"Endocrinology. 143. 55-61 (2002)