|
胎生12日のマウス胚より、RT-PCR法を用いてOASIS遺伝子を単離し、pGEM-T Easyベクタに組み込み、アンチセンスRNAプローブおよびセンスRNAプローブを作成した。センスプローブは対照実験に用いた。これらのプローブについては、電気泳動によりその分子量を調べ、正しいプローブであることを確認した。そこで、胎生12日以降のICRマウス胎仔を摘出しその頭部を4%パラホルムアルデヒドにて浸漬固定した。通法に従い10μmのパラフィン薄切切片とし、プレパラートに貼付し、ディゴキシゲニン(Dig)にてラベルされたプローブにより、ハイブリダイゼーション反応を行い、OASIS遺伝子の発現と消長を検索した。
胎生12-16日以降の歯胚について、発生段階に応じて比較検討した結果は以下の通りである。胎生12日では、歯提およびその周囲には陽性反応を認めなかった。胎生14日では、蕾状期の臼歯および切歯歯胚の上皮にDig陽性反応が認められ始めた。胎生16日の帽状期の臼歯歯胚では内エナメル上皮に、切歯歯胚では上皮であるアピカルループおよび間葉である前象牙芽細胞にDig陽性反応が認められた。
以上より、本年度はまず、OASIS遺伝子は歯の発生段階に応じて、部位及び時期特異的に発現することを明らかとした。よってOASIS遺伝子は、歯胚発生に必須な因子であり、歯胚の形態形成に重要な役割を果たしている可能性が示された。
|
