| 研究概要 |
遅れていたCGRP fragments(4種類)の作製をひとまず完了し、それらの受容体結合能および細胞内情報伝達系に及ぼす影響について検討した。また、それらのペプチドが細胞増殖に及ぼす影響ならびに歯周組織・細胞でのCGRP受容体サブタイプの発現状況についても検討した。
1)CGRPfragmentsの新規合成およびスクリーニング-新規合成のものに加えて商業的に入手可能なCGRPfragments(全8種類)を用意しcAMP産生などを指標としてスクリーニングを行った結果、CGRP_<8-37>, CGRP_<22-37>, [Cys(Acm)^<2,7>]-CGRPには明らかなagonistic/antagonistic活性があることが判明した。
2)生理活性のあるCGRP fragmentsの細胞内情報伝達系に及ぼす影響-骨芽細胞(MG63)においてCGFP_<8-37>には強いantagonistic活性が認められ、CGRP_<1-37>によるcAMP産生などを完全にブロックした。CGRP_<22-37>にも弱いながら同様なantagonistic活性が認められた。また、[Cys(Acm)^<2,7>]-CGRPには中程度のantagonistic活性のみならず弱いagonistic活性があった。
3)生理活性のあるCGRP fragmentsの受容体結合能-蛍光色素で標識したCGRP_<1-37>(FL-CGRP)を用いて結合能の測定した。FL-CGRPは濃度依存性に特異的結合を増加させ、それは非標識CGRP_<8-37>によって競合的に阻害された。しかし、[Cys(Acm)^<2,7>]-CGRPによる競合的阻害は明確ではなかった。
4)CGRP fragmentsの細胞増殖に及ぽす影響-いずれのfragmentsにおいても有意にMG63細胞増殖に影響を及ぼさなかった。Gin-1では、CGRP_<1-37>が弱い有意な増殖促進作用があった。
5)CGRP fragmentsのアポトーシスに及ぼす影響-有意なアポトーシス誘導は認められなかった。
6)歯周組織におけるCGRP受容体サブタイプの発現状況-anti-CRLRおよびanti-RAMP-I抗体を用いて免疫化学的あるいはウェスタンブロット法により、CGRP受容体サブタイプI発現を蛋白レベルで検出した。
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