培養動物細胞発現系を用いたp53機能解析による頭頸部癌の遺伝子診断

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671944
• 研究機関: 獨協医科大学
• 研究代表者: 川又 均 獨協医科大学, 医学部, 助教授 (70224847)
• キーワード: 頭頸部癌 / p53 / p21waf1 / BAX / MDM2 / 細胞内局在 / 転写調節 / ルシフェラーゼアッセイ

研究概要

種々の頭頸部癌培養細胞(HSG, TYS, BHY, HNt, AZA1, AZA3)よりp53 cDNAの全翻訳領域をPCRで増幅し,蛍光蛋白質GFP遺伝子を有する発現ベクターに組み込んだ.全塩基配列を決定すると同時に,細胞内局在,標的遺伝子(P21waf1, BAX, MDM2)に対する転写活性化能を検索した.ヒト骨肉腫細胞であるSaos2細胞(p53遺伝子の欠失はあるがそれ以外の経路は正常であると考えられている)に頭頸部癌細胞由来のp53遺伝子を発現させたところ,AZA1, AZA3由来の野生型p53とHSG由来の変異p53(Asn30Ser),TYS由来の変異p53(Asp281His)は明らかに核に局在した.HNt由来の変異p53(Glu17Lys, His193Leu), BHY由来のトランケートp53(delta 121)はびまん性に細胞質に拡散が認められた.また,HSG-p53は野生型とほぼ同様の転写活性化能を有し,HNt-p53, BHY-p53は検索した標的遺伝子に対して全く転写活性化能を示さなかった.TYS-p53はp21wafに対してはむしろ野生型よりも強い転写活性化能を有するが,BAX, MDM2対しては転写活性化が認められなかった.このp53変異はDNA障害に際し細胞周期は止めるが,アポトーシスは誘導しないという,癌細胞の生存あるいは悪性形質獲得に極めて有利な変異でと考えられる.またHNt由来p53は上記の標的遺伝子に対しては転写活性可能がないが,Saos2細胞にアポトーシスを誘導する能力は残っており,抗癌剤処理から細胞を守るような働きも保有していることが明かとなった.このようなp53の癌原性変異は遺伝子診断上極めて重要なことと考えられる.

研究成果

• [文献書誌] Hino S, Kawamata H, et al.: "TSC-22(transforming growth factor--stimulated clone-22)enhances the radiation-sensitivity of salivary gland cancer cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. (in press). (2002)
• [文献書誌] Hino S, Kawamata H, et al.: "Leucine zipper structure of TSC-22(TGF-beta stimulated clone-22)markedly inhibits the anchorage-independent growth of salivary gland cancer cells"Oncology Report. 9(2). 371-374 (2002)
• [文献書誌] M.O.Hoque, Kawamata H, et al.: "Dihydropyrimidne dehydrogenase mRNA level correlates with the response to 5-Fluorouracil-based chemo-immuno-radiation therapy in human oral squamous cell cancer."International Journal of Oncology. 19(5). 953-958 (2001)
• [文献書誌] Uchida D, Kawamata H, et al.: "Low-dose retinoic acid enhances in vitro invasiveness of human oral squamous-cell-carcinoma cell lines"British Journal of Cancer. 85(1). 122-128 (2001)
• [文献書誌] Uchida D, Kawamata H, et al.: "Role of HGF/c-met system in invasion and metastasis of oral squamous cell carcinoma cells in vitro and its clinical significance"International Journal of Cencer. 93(4). 489-496 (2001)
• [文献書誌] Furihata T, Sakai T, Kawamata H, et al.: "A new in vivo model for studying invasion and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma"International Journal of Oncology. 19(5). 903-907 (2001)