抗Fc受容体Bispecific抗体による難治性歯周炎免疫療法の開発

2001 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 12672032
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 歯周治療系歯学
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 小林 哲夫 新潟大学, 歯学部・附属病院, 講師 (00215344)
• 研究分担者: 杉田 典子 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (30313547)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• キーワード: Fc受容体 / 免疫グロブリン / Porphyromonas gingivalis / r40kDa OMP / ヒト特異抗体 / 好中球 / 貪食能

研究概要

インフォームド・コンセントを得た成人性歯周炎患者21名より歯肉溝滲出液(GCF)・末梢静脈血(PB)より好中球(PMN)を分離後にFcR発現を解析した結果、FcαR発現はPB-PMNに比べて、GCF-PMNで有意に増強していた。また、2種類のFcγR発現はGCF-PMNで有意な減少を示した。更に、FcγR・FcαRを介した殺菌効果を検索したところ、IgG1オプソニン化したPorphyromonas gingivalisに対する貪食・殺菌能は、PB-PMNの方がGCF-PMNと比べて高い一方、IgA1の場合は同等であった。以上から、歯周ポケットPMNの殺菌能賦活化にはFcαRが抗体の標的分子として確実性が高いと判断された。
P.gingivalisを嫌気培養後、超音波破砕処理及びクロマトグラフィーにて、40kDaリコンビナント外膜蛋白質(r40kDa OMP)を作製した。同抗原をヒト抗体産生マウス(KMマウス)腹腔に接種・免疫し、脾細胞を回収した。マウス・ミエローマ細胞と融合後、抗r40kDa OMPヒト特異抗体が合計102クローン作製できた。そのうちIgGは99クローンあり、IgMが3クローンで、IgAクローンは作製できなかった。
P.gingivalis r40kDa OMP及び、その全菌体に対するヒト特異抗体の結合能をELISA法により測定後、結合能の高いクローンについてP.gingivalisに対するPMN貪食能を調べた結果、ポリクローナル抗体と比べて有意に高く、歯周ポケットPMN貪食能賦活化においてヒト特異的抗体IgGでも有効である可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Tetsuo Kobayashi et al.: "Effective In Vitro Clearance of Porphyromonas gingivalis by FcαReceptor I (CD89) on Gingival Crevicular Neutrophils"Infection and Immunity. Vol.69, No.5. 2935-2942 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tetsuo Kobayashi et al.: "The Fcγ Receptor Genotype as a Severity Factor for Chronic Periodontitis in Japanese Patients"Journal of Periodontology. Vol.72, No.10. 1324-1331 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Noriko Sugita et al.: "Increased Frequency of FcγRIIIb-NA1 Allele in Periodontitis-resistant Subjects in an Elderly Japanese Population"Journal of Dental Rescarch. Vol.80, No.3. 914-918 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kouji Yamamoto et al.: "Evidence for a novel polymorphism affecting both N-linked glycosylation and ligand binding of the IgG receptor IIIB (CD16)"Tissue Antigens. Vol.57, No.4. 363-366 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Keiko Yasuda et al.: "Seven single nuclcotide substitutions in human Fcγ receptor HB gene"Tissue Antigens. Vol.58, No.5. 339-342 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] T. Kobayashi, K. Yamamoto, N. Sugita, A.B. van Spriel, S. Kaneko, J. G. J. van de Winkel, H. Yoshie: "Effective In Vitro Clearance of Porphyromonas gingivalis by Fcα Receptor I (CD89) on Gingival Crevicular Neutrophils"Infection and Immunity. Vol. 69, No. 5. 2935-2942 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] T. Kobayashi, K. Yamamoto, N. Sugita, W-L. van der Pol, K. Yasuda, S. Kaneko, J.G.J. van de Winkel, H. Yoshie: "The Fcγ Receptor Genotype as a Severity Factor for Chronic Periodontitis in Japanese Patients"Journal of Periodontology. Vol. 72, No. 10. 1324-1331 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] N. Sugita, T. Kobayashi, Y. Ando, A. Yoshihara, K. Yamamoto, J.G.J. van de Winkel, H. Miyazaki, H. Yoshie: "Increased Frequency of FcγRIIIb-NA1 Allele in Periodontitis-resistant Subjects in an Elderly Japanese Population"Journal of Dental Research. Vol. 80, No. 3. 914-918 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] K. Yamamoto, N. Sugita, T. Kobayashi, K. Okuda, J. G.J. van de Winkel, H. Yoshie: "Evidence for a novel polymorphism affecting both N-linked glycosylation and ligand binding of the IgG receptor IIIB (CD16)."Tissue Antigens. Vol. 57, No. 4. 363-366 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] K. Yasuda, N. Sugita, K. Yamaimoto, T. Kobayashi, H. Yoshie: "Seven single nucleotide substitutions in human Fcγ receptor IIB gene"Tissue Antigens. Vol. 58, No. 5. 339-342 (2001)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より