歯周病原性細菌の病原性因子に対する免疫応答の解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12672040
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 中川 種昭 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (00227745)
• 研究分担者: 石原 和幸 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (00212910)
• キーワード: Porphyromonas gingivalis / gingipain / オプソニン作用

研究概要

【材料および方法】
1.組換えタンパク質の発現および抗体の作製
Kgp遺伝子のcatalytic domain(Kgp-CAT)をPCR法にて増幅した。得られたflagmentをpET32に組み込み、大腸菌にtransformし、発現させた。組換え抗原およびP.gingivalis381全菌体をウサギに免疫し、抗体を得た。
2.Chemiluminescence (CL) assay
P.gingivalisATCC33277、381、W50の3株を用いた。ヒト新鮮血から1.5x10^7cell/mlになるように分離した多形核白血球(PMN)に、抗P.gingivalis抗体、及び抗Kgp-CAT抗体にそれぞれ、P.gingivalis菌体、補体、ルミノールを混合し、PMNの活性をケミルミネッセンス(CL assay)により測定した。
Gingipainのオプソニン作用に対する影響を検索するために、P.gingivalisのプロテアーゼ欠損株を用い野生株と比較し長崎大学中山浩次先生より恵与されたP.gingivalis128,137の2株を用いた。
【結果】
1.補体存在下で、抗体に抗P.gingivalis抗体、抗Kgp-CAT抗体それぞれと、P.gimgivalis ATCC33277、381、W50の3株を抗原として用いたCL assayを行った結果、総ての株に対してPMNの貧食作用が促進していた。
2.P.gingivalis変異株128、137を抗原として用いたCL assayでは、gingipainがすべて欠損している128でその貧食作用が最も高く、次いでRgpとHAGの欠損株である137、野生株の33277の順であった
3.P.gingivalis ATCC33277株、381株、W50株のCL assayを比較したところ抗P.gingivalis抗体存在下ではW50株のPMNの貧食作用が最も低かった。逆に抗kgp抗体存在下ではW50株に対する効果の方が33277株に比べ高かった。

研究成果

• [文献書誌] Adachi, M.et al.: "Effect of professional oral care on elderly living in nursing homes"Oral Surgery Oral Medicine Oral Pathology Oral Radiology and Endodontology. 94・2. 191-195 (2002)
• [文献書誌] Chattin-Kacouris, B.R.et al.: "Heat schock protein of Mycoplasma salivarium and Mycoplasma orale strains isolated from HIV-seropositive patients"Bull Tokyo Dent Coll. 43. 231-236 (2002)
• [文献書誌] Sumida, S.et al.: "Transmission of periodontal disease associated bacteria from teeth to osseointegrated implant regions"Int J Oral Maxillofac Implants. 17・5. 696-702 (2002)
• [文献書誌] Ihara H.et al.: "Detection of Campylobacteer rectus in periodontitis sits by monoclonal antibody"J Periodontal Res.. 38・1. 64-72 (2003)
• [文献書誌] Okuda, M.et al.: "Reduction of potential respiratory pathogens by oral hygienic treatment in patients undergoing endotracheal anesthesia"J. Anesth.. (in press).
• [文献書誌] Okuda, K.et al.: "Ecological and immunopathological implication of oral bacteria in Helicobacter pylori infected disease"J. Periodontol. 74・1. 123-128 (2003)