Nbs1遺伝子欠損マウスを用いた染色体安定化機構の解明

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12672201
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 松浦 伸也 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 助教授 (90274133)
• 研究分担者: 篠原 美紀 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 助手 (80335687) ; 小松 賢志 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 教授 (80124577)
• キーワード: NBS / AT / NBS1 / 電離放射線 / dsb / ATM / テロメア / フォーカス

研究概要

Nbs1遺伝子久損および遺伝子二重欠損細胞の作成:Nbs1遺伝子欠損ヘテロマウスをAtmまたはKu70遺伝子ヘテロ欠損マウスとそれぞれ交配してF2マウスを誕生させ、尻尾からDNAを抽出してPCR法で二重ヘテロ欠損マウスを同定した。得られた二重ヘテロ欠損マウスを交配して8.5日齢マウス胚を採取し、Nbs1/AtmおよびNbs1/Ku70の遺伝子二重欠損細胞株同定を進めている。
遺伝子欠損細胞の機能解析:Ku70欠損細胞と、Atm欠損細胞とNbs1欠損細胞について、以下の表現型の差異を比較検討した。
(i)放射線誘発染色体構造異常:細胞に2Gyのガンマ線を照射して24時間培養後、コルセミド処理して染色体標本を作成する。100細胞の染色体核板を観察し染色分体異常の出現頻度を計測した。
(ii)放射線致死感受性:細胞に1、2、4Gyのガンマ線を照射してディシュに播種・培養し、約2週間後に出現するコロニー数を計測して生存率曲線を作成した。
いずれの細胞株も正常細胞に比べ、放射線高感受性であることを確認した。

研究成果

• [文献書誌] H.Tauchi, et al.: "The FHA domain of NBS1 is essential for nuclear foci formation after irradiation, but not essential for hRAD5O/hMRE11/NBS1 complex DNA repair activity"J. Biol. Chem.. 276. 12-15 (2001)
• [文献書誌] Ubagai, T. et al.: "Comparative genomic hybridization analysis suggests a gain of chromosome 7p associated with lymph node metastasis is non small cell lung cancer"Oncology Reports. 8. 83-88 (2001)
• [文献書誌] Yamada, M. et al.: "Combined immunodeficiency, chromosomal instability, and postnatal growth deficiency in a Japanese girl"Am. J. Med. Genet.. 100. 9-12 (2001)
• [文献書誌] Buscemi, G. et al.: "Chk2 activation dependence on Nbs1 after DNA damage"Mol. Cell. Biol.. 21. 5214-5222 (2001)
• [文献書誌] Sakata, K. et al.: "Expression of genes involved in repair of DNA double-strand breaks in tumors"Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.. 49. 161-167 (2001)
• [文献書誌] Kato, K. et al.: "Organ doses from fadiation therapy in atomic bomb survivors"Radiat. Res.. 155. 785-795 (2001)