網膜毛細血管内皮細胞の細胞増殖制御因子の遺伝子解析

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12672206
• 研究機関: 富山医科薬科大学
• 研究代表者: 細谷 健一 富山医科薬科大学, 薬学部, 教授 (70301033)
• 研究分担者: 片山 和憲 富山医科薬科大学, 薬学部, 助教授 (70126514)
• キーワード: 血液網膜関門 / 網膜毛細血管内皮細胞株 / 網膜ペリサイト株 / MCT1 / 共培養 / 血管新生 / system x_c^- / 酸化的ストレス

研究概要

温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラットから樹立した条件的不死化網膜毛細血管内皮細胞(TR-iBRB)と条件的不死化網膜ペリサイト株(TR-rPCT)を用いて共培養を行い、TR-iBRBにおけるmonocarboxylate transporter 1(MCT1)mRNAの発現量変化を解析した。TR-rPCTと共培養を行ったTR-iBRBのMCT1mRNAは、TR-iBRBの単独培養のMCT1 mRNAと比較して41.9%減少した。網膜毛細血管の新生血管は、ペリサイトが脱落し、内皮細胞においてMCT1の発現が上昇していると報告されている。従って、TR-iBRB2とTR-rPCT1を用いた共培養は血管新生時のin vivo現象を一部は再現できるin vitro実験系であることが示唆された。血液網膜関門の防御機構としてL-cystineの輸送機構を解析したところ、TR-iBRBはsystemx_c^-のmRNAであるxCTおよび4F2hcが発現していた。TR-iBRBにおける[^<14>C]L-cystineの取り込みはsystem x_c^-の特徴を示した。酸化的ストレスのモデルであるdiethyl maleate(DEM)100μMで24時間処理を行ったTR-iBRBにおいて、xCT mRNAの発現は非処理時の2.6倍に増加し、[^<14>C]L-cystineの取り込みは2.3倍に上昇した。血液網膜関門では酸化的ストレスによりsystem x_c^-が誘導され、L-cystlneの輸送を活性化させることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] K.Hosoya: "Brain-to-blood efflux transport of estron-3-sulfate at the blood-brain barrier in rats"Life Sci.. 67. 2699-2711 (2000)
• [文献書誌] H.Asaba: "Blood-brain barrier is involved in the efflux transport of a neuroactive steroid, dehydroepiandrosterone sulfate, via organic anion transporting polypeptide 2"J.Neurochem.. 75. 1907-1916 (2000)
• [文献書誌] K.Hosoya: "Conditionally immortalized retinal capillary endothelial cell lines (TR-iBRB) expressing differentiated endothelial cell functions derived from a transgenic rat"Exp.Eye Res.. 72. 163-172 (2001)
• [文献書誌] T.Terasaki,Y.Ikada and Y.Shimizu: "Tissue Engineering for Therapeutic Use 4"Elsevier Science B.V.. 192 (2000)
• [文献書誌] V.H.L.Lee: "Retina, Third Edition"S.J.Pyan, Mosby. 2601 (2001)