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我々は、細胞内輸送障害の原因となるサイログロブリン(Tg)遺伝子異常症として、C1263Rミスセンス変異を4例4家系、C1995Sミスセンス変異を4例2家系に同定し、先天性甲状腺機能低下症動物モデルとしてrdwラットにG2320Rのミスセンス変異を見い出した。これらの変異を有するTgは、細胞内を正常に輸送されることなく、小胞体内に蓄積する。本年度、これ等の細胞内輸送障害型変異Tgを導入した安定発現細胞株を樹立し、細胞内でおこる遺伝子発現の変化を既知遺伝子のcDNAアレイおよびサブトラクション-PCRを用いて作成したcDNAライブラリーのアレイを用いて検討した。発現レベルの差は定量的RT-PCRにて確認した。正常および変異TgはpcDNA3.1発現ベクターにクローニングし、G401腎細胞株に導入した後、株化した。既知遺伝子のcDNAアレイ(Atlas 3.6 array;3528遺伝子、Atlas stress array;234遺伝子)を用いた検討では、C1263R、C1995S変異Tg発現細胞株ともに2倍以上発現増加している遺伝子を陽性とした。変異Tg発現細胞株で発現増加の認められた遺伝子は、リボゾーム蛋白、分子シャペロン、プロテアゾーム、細胞増殖、アポトーシス、転写因子、DNA複製に関連する遺伝子が多かった。サブトラクション-PCR法にて作成したcDNAライブラリーでは、1500クローンをスクリーニングし、654クローンにインサートを認め、うち発現レベル差の大きかった244遺伝子をシークエンスした。うち、81遺伝子はリボゾーム蛋白遺伝子であったが、他は分子シャペロン、プロテアゾーム、転写因子、DNA複製に関連する遺伝子であったが、約30遺伝子は現在機能不明の遺伝子であった。来年度は、さらに多くの遺伝子をアレイを用いて検討するとともに、各遺伝子の機能を検討する予定である。
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