| 研究課題/領域番号 |
12680145
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| 研究機関 | 名古屋女子大学 |
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研究代表者 |
大羽 和子 名古屋女子大学, 家政学部, 教授 (80023480)
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| 研究分担者 |
松岡 信 名古屋大学, 生物分子応答研究センター, 教授 (00270992)
藤江 歩巳 名古屋女子大学, 家政学部, 副手
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| キーワード | アスコルビン酸 / ビタミンC / L-ガラクトノラクトンデヒドロゲナーゼ / サツマイモ / ジャガイモ / 切断傷害 / 形質転換植物 / アンチセンスコンストラクト |
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| 研究概要 |
1.サツマイモのL-ガラクトノラクトンデヒドロゲナーゼ(GLDH)に対する特異抗体の調製
サツマイモのGLDHのcDNAをpET32ベクターとつなぎ(GLDH in pET32)、大腸菌細胞JM109をトランスホーメーションする事により、GLDH in pET32を増幅させた。IPTGを加えてタンパク質合成を誘導させ、誘導されたタンパク質をSDS-PAGEで確認し、ゲルから目的バンドを切り出し、ラットを免疫して抗血清を得た。抗血清をウエスタンブロットで確認したところ、GLDHに対する特異抗体ができていることが判明した。この抗体はサツマイモのGLDHのみではなく、ジャガイモのGLDHを認識することも明らかになった。
2.芋類の切断傷害刺激に伴うGLDH活性およびGLDHタンパク質量の増大メカニズムの解明
サツマイモおよびジャガイモを切断、放置するとビタミンC量が増大し、2日後に最大になり、以後減少した。GLDH活性およびGLDHタンパク質量は切断後1日間に最も増大し、以後高値が続いた。GLDH活性とGLDHタンパク質量がパラレルに増大したので、切断刺激に伴うGLDH活性の増大はGLDHタンパク質の生合成によることが明らかになった。
3.サツマイモGLDHの遺伝子を導入した形質転換植物の作成
GLDH遺伝子のセンス、アンチセンスコンストラクトを作製し、形質転換体の作出に慣れているタバコ植物を使って、センス、アンチセンス形質転換タバコの作出を試みている。
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