| 研究概要 |
最近、突然変異誘発にかかわるDNAポリメラーゼζとηが見いだされた。突然変異誘発に対するそれらの遺伝子の役割、損傷の種類と各ポリメラーゼとの対応を明らかにすることが本研究の第一の目的である。さらに種々の変異原によるDNA損傷がそれらのポリメラーゼの働きでどのような突然変異となるかを調べることが第二の目的である。
導入遺伝子と内在遺伝子との間で高頻度に相同組換えを起こすことが知られるニワトリDT40細胞を用いて、内在のDNAポリメラーゼζ遺伝子(Rev3)をノックアウトさせることを目的に、ニワトリRev3遺伝子を単離した。また突然変異アッセイのためのhprt(+/-)ヘテロ接合体株を樹立した。現在Rev3ノックアウト細胞を作成中である。
紫外線によってヒト細胞に生じる突然変異はG:C→A:Tトランジションが主であること、紫外線によって生じる(6-4)光生成物とシクロブタンピリミジンダイマー(CPD)が突然変異誘発に寄与する割合が等しいことを、(6-4)光回復酵素とCPD光回復酵素および紫外線照射したシャトルベクターを用いて明らかにした。
ベンゼンの代謝産物であるパラベンゾキノンとムコンアルデヒドはどちらもG:C塩基対に突然変異を起こしやすく、とりわけG:C→A:T,T:A塩基置換を多く起こすことがわかった。また、もう1つの代謝産物であるハイドロキノンはNADH、銅イオン存在下で欠失突然変異を起こしやすいことがわかった。そのような条件下では発生したヒドロキシラジカルがDNA損傷を起こし、それがDNA鎖切断へとつながるものと推測された。DNAポリメラーゼζとηのこれら変異への関わりをIn vitroアッセイによって明確にすることが次年度の課題である。
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