|
LC/MSを用いて粗精製糖脂質画分をon-lineで直接質量分析を行い、構成成分の構造を迅速に解析する方法を目指して研究を行った。LC/MSの分析性能を決定付ける要因の比重は、HPLCに関連する要因に大きく偏っている。とくに、糖脂質は親水性部分の糖鎖が同一でありながら疎水性部分の炭化水素鎖長が異なる分子種を同一の分子群として扱うのでそれぞれの分子種の挙動がHPLCの分離に大きく関わってくる。今回の研究ではHPLCの分離を最適化する条件の選択に多くの時間を割いた。HPLCカラムには疎水性部分の違いによる分離度が少ない順相系のシリカゲルカラムを用いた。ガンダリオシドがアセトニトリルに溶けにくいことから、2-propanolと水の系を用いて分析を試みた。MSに対して問題を起こさない範囲のいろいろな添加剤を試してみたが、tetramethylammonium carbonateが良好な分離を示すことがわかった。しかし、この添加剤を用いて長時間分析を続けているとカラムが目詰まりを起こしてしまう問題が発生した。また、この溶媒系ではガンダリオシドの各ピークの幅は期待したほど狭くならなかった。一方、アセトニトリル-水の系はガングリオシドが溶けにくいという欠点はあるものの、ガンダリオシドの各ピークの幅は満足できる程度に狭くなった。質量分析では内径2mmのHPLCカラムを用いた場合に100ngのガングソオシドでも十分な感度で検出できることがわかった。モノシアロガングリオソドは1価と2価イオン、ジシアロガングリオシドは2価イオン、トリシアロガングリオシドは2価と3価イオンが観測された。MS/MSによる多成分の構造解析の実現が今後の課題である。
|
