複合糖鎖硫酸化の生物学的機能の解明

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12680610
• 研究機関: 愛知教育大学
• 研究代表者: 羽渕 脩躬 愛知教育大学, 教育学部, 教授 (90024067)
• キーワード: コンドロイチン4硫酸転移酵素 / コンドロイチン6硫酸転移酵素 / コンドロイチン硫酸E / イカ軟骨 / シピレエイ

研究概要

1.マウス及びヒトコンドロイチン4硫酸転移酵素をクローニングし、発現酵素の活性測定、組織での発現パターン解析、染色体マッピングを行った。
2.コンドロイチン4硫酸転移酵素の相同遺伝子として、脳下垂体で黄体形成ホルモンの糖鎖合成に関与している、GalNAc4硫酸転移酵素をクローニングし、その特異性を決定した。
3.イカの軟骨からコンドロイチン硫酸E合成を行うGalNAc4S-6STを均一に精製し特異性を決定した。精製酵素のLys-C分解で生じるペプチドのアミノ酸配列を決定した。このアミノ酸配列に基づき縮重オリゴヌクレオチドを合成し、イカ軟骨から抽出したmRNAを鋳型としてRT-PCRを行い、cDNAの断片を増幅した。イカのcDNAと相同性を示すヒトのcDNAを検索し、発現ベクターに組み込み動物細胞で発現し、酵素活性を検出した。今後発現した酵素の特異性の決定を行う。
4.シピレエイ神経組織からクローニングされたNSISTを動物細胞で発現し、コンドロイチン6硫酸転移酵素と似た酵素活性を検出した。今後発現した酵素の特異性と、遺伝子導入細胞で合成される特異的な硫酸化糖鎖の構造を決定する。

研究成果

• [文献書誌] Torii,T.,Fukuta,M.,and Habuchi,O.: "Sulfation of sialyl N-acetyllactosamine oligosaccharides and fetuin oligosaccharides by keratan sulfate Gal-6-sulfotransferase."Glycobiology,. 10. 203-211 (2000)
• [文献書誌] Yamauchi,S.,Mita,S.,Matsubara,T.,Fukuta,M.,Habuchi,H.,Kimata,K.,and Habuchi,O.: "Molecular cloning and expression of chondroitin 4-sulfotransferase."J.Biol.Chem.. 275. 8975-8981 (2000)
• [文献書誌] Habuchi,O.: "Diversity and functions of glycosaminoglycan sulfotransferases."Biochim.Biophys.Acta. 1474. 115-127 (2000)
• [文献書誌] Ito,Y.,and Habuchi,O.: "Purification and characterization of N-acetylgalactosamine 4-sulfate 6-O-sulfotransferase from the squid cartilage."J.Biol.Chem.. 275. 34728-34736 (2000)
• [文献書誌] Okuda,T.,Mita,S.,Yamauchi,S.,Matsubara,T.,Yagi,F.,Yamamori,D.,Fukuta,M.,Kuroiwa,A.,Matsuda,Y.,and Habuchi,O.: "Molecular cloning, expression and chromosomal mapping of human chondroitin 4-sulfotransferase, whose expression pattern is different from that of chondroitin 6-sulfotransferase."J.Biochem.. 128. 763-770 (2000)
• [文献書誌] Okuda,T.,Mita,S.,Yamauchi,S.,Fukuta,M.,Nakano,H.,Sawada,T.,and Habuchi,O.: "Molecular cloning and characterization of GalNAc 4-sulfotransferase expressed in human pituitary gland."J.Biol.Chem.. 275. 40605-40613 (2000)