| 研究概要 |
幼若ラットは、元来母のにおいと母性行動による体性感覚刺激の対提示による古典的条件付けにより、母のにおいを学習する自然なモデルである。体性感覚刺激をより再現性・定量性に優れた電撃を用いることにより、生後12日目のラットににおいの嫌悪学習を成立させている。これまでに嗅球内にbicucullineの注入が、においの嫌悪学習が促進させることから、嗅球内シナプスの可塑性がこの学習に関与する可能性が示唆された。
一方記憶学習の基盤と考えられているシナプス可塑性には細胞内カスケードにおいてCREB(cyclic AMP response binding protein)の関与が知られている。そこで嗅球内シナプス可塑性とCREBとの関与を検索するために、まずCREB antisense ODNの嗅球内注入によりCREB合成を阻害すると、においの学習が阻害された。さらに可塑性を誘導するCREBのリン酸化反応の時間経過を明らかにする目的で、生後11日目の学習成立トレーニング後時間を変えて嗅球を摘出し、得られたサンプルを用いてリン酸化CREBの一次抗体によるウェスタンブロッティングを行った。これまでのところ以下のような結果が得られた。
1)におい刺激と電撃の対提示トレーニング後10分でリン酸化CREBは増加しはじめ、1〜2時間後がピークとなり、4時間後まで持続した後6時間後で消失する。
2)CREBのリン酸化に関わる酵素である、CaMKII, MAPK, PKAの阻害剤を注入した。するといずれもリン酸化CREBの増加が抑制された。これは行動実験における学習阻害効果をうらづける。
3)CREBリン酸化反応の前段階である、MAPKのリン酸化反応にかかわるPI-3K/Aktの活性もほぼ同じくトレーニング後30分には増加し、1時間ほど持続することが、リン酸化Aktの一次抗体によるウェスタンブロットで明らかになった。
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