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GABAニューロンの形成過程およびその移動パターンを解明する目的で、GABAニューロンをgreen fluorescent protein(GFP)遺伝子で標識したマウス(GAD67遺伝子-GFPノックインマウス)を作成して、検討を行った。
具体的には、グルタミン酸脱炭酸酵素67(GAD67)遺伝子にGFP遺伝子をノックインしたコンストラクトを用いて、キメラマウスを作成した。キメラマウスと野生型マウスとを交配することによりキメラマウスからES細胞由来の仔を得た。Southern blotとPCRを用いたゲノタイピングにより、ノックインマウスであることを同定した。また、このノックインマウスのゲノタイピングには、蛍光顕微鏡でGFPの蛍光を観察する方法が有力であることを明らかにした。
ノックインマウスについて脳組織標本を作成し、GFPの発現する細胞を検討した結果、GABAニューロンに類似した発現パターンを観察した。ノックインマウスの胎児脳標本についてGFPの発現を検討した結果、(1)胎生早期からseptumに多量のGABAニューロンが存在すること、(2)大脳基底核原基から大脳皮質へのGABAニューロンの移動様式はtangenitalの方向が主であるが、radialの方向へ動くニューロンも存在することを観察した。また、ノックインマウスの中枢神経系以外でのGFPの発現を検討した結果、髭と歯牙にGFPの発現を観察した。これらのGFP発現部位はこれまで報告されているGAD67の発現部位と一致していた。
以上の結果は、作成したノックインマウスが中枢神経の内外でGABAニューロンの形成過程やGAD67遺伝子発現をモニターするのに有力な資材であることを示唆している。
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