2001 年度実績報告書

N-結合型糖鎖生合成初期に必要なヒトマンノース転移酵素群の解析

研究課題

研究課題/領域番号	12760066
研究機関	東海大学
研究代表者	高橋哲夫東海大学, 工学部, 助教授 (10256167)
キーワード	N-結合型糖鎖 / リピド中間体 / マンノース転移酵素 / cDNAクローニング / ゲノム解析
研究概要	本研究は、N-結合型糖鎖生合成初期に必要な3種のマンノース転移酵素(MT-I,MT-III,MT-IV)をコードするヒト遺伝子の構造・機能を解析することを目的としている。本年度は、以下の1〜4を主として行った。 1.ヒトMT-III及びMT-IV遺伝子のコード領域の解明ヒトMT-III遺伝子に関しては、完全長cDNAのクローニングに成功し、その全コード領域の構造決定を完了した。ヒトMT-IV遺伝子に関しては、当遺伝子を含むYACクローン923f5中の約1MbのヒトゲノムDNA断片をカバーするBACクローン群を用いてコンティグマップを作製した。現在、これらの整理された各BACクローンを用いてG258変異株の変異相補活性の検討を行い、遺伝子局在領域を限定している。 2.ヒトMT遺伝子の転写調節領域の解明コード領域が確定したヒトMT-I遺伝子の上流0.2kb〜1.0kbのゲノムDNA領域に関して、現在CATアッセイを行い、転写調節に働いている領域を限定している。今後、ヒトMT-III遺伝子に関しても同様の解析を行う予定である。 3.ヒトMT酵素の大量発現系の構築ヒトMT-I遺伝子を用いて3種のタグ(c-myc,FLAG,HA)を付加したコンストラクトを作製し、ヒトHeLa細胞に導入した。現在、得られた各タグ付加MT-I遺伝子の安定形質転換株について、各タグに対する抗体を用いてウェスタンプロット解析を行い、MT-I酵素の発現量を解析している。 4.動物細胞におけるヒトMT発現抑制効果の解析マウスFM3A細胞にヒトMT-I遺伝子のアンチセンスDNAを導入し、得られた安定形質転換株を解析したが、明確な抑制効果が認められなかった。そこで、マウスMT-I遺伝子を新規にクローニングし、そのアンチセンスDNAをFM3A細胞に導入した。現在、その発現抑制効果を検討中である。

研究成果

(13件)

すべてその他

すべて文献書誌 (13件)

[文献書誌] 高橋哲夫: "リピド中間体生合成に働くマウス・マンノース転移酵素III遺伝子の解析"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 135 (2001)
[文献書誌] 増田貴久: "マウスリピド中間体生合成変異株G258の変異に相補的なヒトゲノム領域の近傍を含むBACクローンのスクリーニング"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 135 (2001)
[文献書誌] 奥冨諭: "リピド中間体生合成関連ヒトマンノース転移酵素III遺伝子の5'側領域の解析"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 136 (2001)
[文献書誌] 増田貴久: "マウスG258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するヒト遺伝子のクローニングに向けて"第11回ドリコールおよびイソプレノイド研究会講演要旨集. 4 (2001)
[文献書誌] 高橋哲夫: "リピド中間体生合成初期に働く新規ヒトマンノース転移酵素遺伝子の同定"第11回ドリコールおよびイソプレノイド研究会講演要旨集. 5 (2001)
[文献書誌] Tetsuo Takahashi: "Analysis of the three mannosyltransferase genes required for the early assembly of the lipid-linked oligosaccharide in mammals"Glycoconjugate Journal. 18・1/2. 118 (2001)
[文献書誌] 高橋哲夫: "リピド中間体生合成に働く酵母ALG11遺伝子に相同なヒト遺伝子の同定"生化学. 73巻・8号. 824 (2001)
[文献書誌] 奥冨諭: "リピド中間体生合成に働くヒトマンノース転移酵素III遺伝子の酵母alg2変異株における発現"生化学. 73巻・8号. 824 (2001)
[文献書誌] 加藤亜紀子: "β1,4-マンノース転移酵素をコードするマウス遺伝子Mmat-1の解析"生化学. 73巻・8号. 823 (2001)
[文献書誌] 増田貴久: "マウスG258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するヒト遺伝子のクローニング"生化学. 73巻・8号. 823 (2001)
[文献書誌] 根立隆志: "リピド中間体生合成に働くヒトHmat-1遺伝子の上流領域のクローニング及び解析"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)
[文献書誌] 長谷川勉: "リピド中間体生合成に働くヒトマンノース転移酵素Iの発現系の構築"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)
[文献書誌] 増田貴久: "G258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するYACクローンに関するBACコンティグマップの作成"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)

2001 年度 実績報告書

N-結合型糖鎖生合成初期に必要なヒトマンノース転移酵素群の解析

研究代表者

高橋 哲夫 東海大学, 工学部, 助教授 (10256167)

研究成果

[文献書誌] 高橋 哲夫: "リピド中間体生合成に働くマウス・マンノース転移酵素III遺伝子の解析"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 135 (2001)

[文献書誌] 増田 貴久: "マウスリピド中間体生合成変異株G258の変異に相補的なヒトゲノム領域の近傍を含むBACクローンのスクリーニング"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 135 (2001)

[文献書誌] 奥冨 諭: "リピド中間体生合成関連ヒトマンノース転移酵素III遺伝子の5'側領域の解析"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 136 (2001)

[文献書誌] 増田 貴久: "マウスG258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するヒト遺伝子のクローニングに向けて"第11回ドリコールおよびイソプレノイド研究会講演要旨集. 4 (2001)

[文献書誌] 高橋 哲夫: "リピド中間体生合成初期に働く新規ヒトマンノース転移酵素遺伝子の同定"第11回ドリコールおよびイソプレノイド研究会講演要旨集. 5 (2001)

[文献書誌] Tetsuo Takahashi: "Analysis of the three mannosyltransferase genes required for the early assembly of the lipid-linked oligosaccharide in mammals"Glycoconjugate Journal. 18・1/2. 118 (2001)

[文献書誌] 高橋 哲夫: "リピド中間体生合成に働く酵母ALG11遺伝子に相同なヒト遺伝子の同定"生化学. 73巻・8号. 824 (2001)

[文献書誌] 奥冨 諭: "リピド中間体生合成に働くヒトマンノース転移酵素III遺伝子の酵母alg2変異株における発現"生化学. 73巻・8号. 824 (2001)

[文献書誌] 加藤 亜紀子: "β1,4-マンノース転移酵素をコードするマウス遺伝子Mmat-1の解析"生化学. 73巻・8号. 823 (2001)

[文献書誌] 増田 貴久: "マウスG258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するヒト遺伝子のクローニング"生化学. 73巻・8号. 823 (2001)

[文献書誌] 根立 隆志: "リピド中間体生合成に働くヒトHmat-1遺伝子の上流領域のクローニング及び解析"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)

[文献書誌] 長谷川 勉: "リピド中間体生合成に働くヒトマンノース転移酵素Iの発現系の構築"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)

[文献書誌] 増田 貴久: "G258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するYACクローンに関するBACコンティグマップの作成"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)

2001 年度実績報告書

高橋哲夫東海大学, 工学部, 助教授 (10256167)

[文献書誌] 高橋哲夫: "リピド中間体生合成に働くマウス・マンノース転移酵素III遺伝子の解析"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 135 (2001)

[文献書誌] 増田貴久: "マウスリピド中間体生合成変異株G258の変異に相補的なヒトゲノム領域の近傍を含むBACクローンのスクリーニング"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 135 (2001)

[文献書誌] 奥冨諭: "リピド中間体生合成関連ヒトマンノース転移酵素III遺伝子の5'側領域の解析"日本農芸化学会誌. 75巻・臨時増刊号. 136 (2001)

[文献書誌] 増田貴久: "マウスG258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するヒト遺伝子のクローニングに向けて"第11回ドリコールおよびイソプレノイド研究会講演要旨集. 4 (2001)

[文献書誌] 高橋哲夫: "リピド中間体生合成初期に働く新規ヒトマンノース転移酵素遺伝子の同定"第11回ドリコールおよびイソプレノイド研究会講演要旨集. 5 (2001)

[文献書誌] 高橋哲夫: "リピド中間体生合成に働く酵母ALG11遺伝子に相同なヒト遺伝子の同定"生化学. 73巻・8号. 824 (2001)

[文献書誌] 奥冨諭: "リピド中間体生合成に働くヒトマンノース転移酵素III遺伝子の酵母alg2変異株における発現"生化学. 73巻・8号. 824 (2001)

[文献書誌] 加藤亜紀子: "β1,4-マンノース転移酵素をコードするマウス遺伝子Mmat-1の解析"生化学. 73巻・8号. 823 (2001)

[文献書誌] 増田貴久: "マウスG258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するヒト遺伝子のクローニング"生化学. 73巻・8号. 823 (2001)

[文献書誌] 根立隆志: "リピド中間体生合成に働くヒトHmat-1遺伝子の上流領域のクローニング及び解析"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)

[文献書誌] 長谷川勉: "リピド中間体生合成に働くヒトマンノース転移酵素Iの発現系の構築"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)

[文献書誌] 増田貴久: "G258変異株のリピド中間体生合成変異を相補するYACクローンに関するBACコンティグマップの作成"日本農芸化学会誌. 76巻・臨時増刊号(発表予定). (2002)