|
本研究は、申請者らがTrypanosoma bruceiにおいて始めてクローニングに成功したGPIアンカー生合成に関与する遺伝子をノックアウトしたプロサイクリック型トリパノソーマで、表面コートタンパク質であるPARP(プロサイクリン)の挙動を調べるというものである。プロサイクリック型トリパノソーマよりGPIの生合成に関与する遺伝子をノックアウトするとGPIの生合成はその遺伝子が関与しているステップで停止しており、そのため通常原虫表面に大量に発現されているプロサイクリンは全く検出出来なくなっていた。
そこでノックアウトトリパノソーマにおけるパルス・チェイス実験を行うと、原虫表面に発現されなかったプロサイクリンは非常に短時間のうちに原虫内で分解され、その後分解を受けながら細胞外へと分泌されていることが明らかとなった。
続いてこの分解がGPIアンカー生合成能欠失トリパノソーマにおいて共通の現象であることを確認するため、GPIアンカー生合成経路の最終ステップ、即ちアンカーをタンパク質に結合させるステップに働いている酵素であるトランスアミダーゼのサブユニットの1つをクローニングし、更にその遺伝子をノックアウトしたプロサイクリック型トリパノソーマを作製した。このノックアウト変異株では完成型のGPIは合成されていたが原虫表面のプロサイクリンの発現は消失していた。現在このノックアウト変異株におけるプロサイクリンの細胞内での挙動を検討中である。
|
