| 研究概要 |
研究目的:
蛍光イオン指示薬を負荷した摘出灌流心による、whole heartの虚血再灌流モデルを用いて、Ca preconditioning(CP)を施行、細胞内Caイオン動態を観察した。CPの心筋保護機序として虚血・再灌流における細胞内Ca過負荷を抑制するか否かを検討した。
方法:
1)摘出灌流心標本と血行動態 300-350gの雄性Sprague-Dawleyラットの摘出心をLangendorff法、Ca^<2+>2mMのHEPES-Tyrode緩衝液にて定流灌流した。虚血は冠灌流量を10%に減少させるlow-flow ischemiaとし、同時にペーシングを加えた。さらに左室圧、心電図を同時モニターした。
2)細胞内Ca^<2+>動態([Ca^<2+>]i)の測定
蛍光指示薬4μM fura-2を経冠動脈的に心筋に負荷し,340nm/380nmのUV励起光による500nmの蛍光強度比を光ファイバー照射測光ユニット(日本分光CAF110)を用いて測定。
3)Ca preconditioningの作成
高Ca溶液による(CPHC):灌流条件を通常のTyrode溶液から高Ca,Tyrode溶液(Ca^<2+>:3.5mM)に1分間変換し、再び通常の灌流液に戻した。
低Na溶液による(CPLN):灌流液をTyrode溶液から、低Na,Tyrode溶液(Na^+:70mM,Tris:70mMに調整)に1分間変換した。低Na灌流により細胞内外のNa勾配に変化が生じ、reverse mode Na/Ca交換系が作動し、Caの細胞内への流入が起こる。
4)灌流実験プロトコール。4群に分けて検討した。虚血10分、再灌流15分の対照群に対して、CPHC群、CPLN群ともにCa preconditioningを2回施行後、虚血10分、再灌流15分施行。さらにIP群としてIschemic preconditioningを2回施行後、虚血再灌流を行った。
結果、結論:CPHC群、CPLN群ともにpreconditioningにより、一過性の細胞内Caの上昇がみられた。虚血時の細胞内Caの上昇はCPLN群にて抑制された。再灌流後のrate pressure productはいずれのpreconditioning群においても回復傾向が得られた。CPの保護効果として細胞内Ca過負荷の軽減が一部関与する。
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