天疱瘡における抗原特異的B細胞の検出法並べにin vitro抗体産生系の開発

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12770455
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 角田 和之 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (60265915)
• キーワード: 自己免疫 / 自己抗体 / B細胞 / 天疱瘡 / ELISPOT法 / デスモグレイン / 細胞接着 / カドヘリン

研究概要

本研究では、天疱瘡における自己抗体を産生するB細胞を検出する方法を組換え天疱瘡抗原を用いたELISPOT法により確立することを目的とする。末梢血中に存在する天疱瘡抗原特異的B細胞の数が、病勢と相関するか検討し、B細胞を標的とした治療法の開発の基礎的データとする。さらに、自己抗体産生におけるT細胞、B細胞の相互作用を検討するために、in vitroにおける自己抗体産生系を構築することを目的とする。本年度は、尋常性天疱瘡抗原(Dsg3)に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を陽性細胞として用いて、組換えDsg3を抗原としたELISPOTによる検出系を確立した。さらに、組換えDsg3にて免疫したマウスの脾臓、リンパ節、骨髄および、末梢血から単核球を分離し、Dsg3組換え抗原蛋白を用いたELISPOT法により、各臓器中に含まれるDsg3特異的抗体を産生するB細胞の算定した。また、我々の開発した天疱瘡モデルマウスにおける抗体産生細胞をELISPOT法により検出し、経時的変化を検討した。次年度には、天疱瘡患者末梢血より分離されたDsg3特異的B細胞によるin vitro抗体産生系の開発し、in vitro抗体産生系におけるT・B細胞相互作用の解析を行う予定である。

研究成果

• [文献書誌] Nishifuji K,Amagai M,Kuwana M,Iwasaki T,Nishikawa T: "Detection of antigen-specific B cells in patients with pemphigus vulgaris by enzyme-linked immunospot (ELISPOT) Assay : requirement of T cell collaboration for autoantibody production."J Invest Dermatol. 114. 88-94 (2000)
• [文献書誌] Amagai M,Tsunoda K,Suzuki H,Nishifuji K,Koyasu S,Nishikawa T: "Use of autoantigen knockout mice to develop an active autoimmune disease model of pemphigus."J Clin Invest. 105. 625-631 (2000)
• [文献書誌] Hata Y,Fujii Y,Tsunoda K,Amagai M: "Production of the entire extracellular domain of BP180 (type XVII collagen) by baculovirus expression."J Dermatol Sci. 23. 183-190 (2000)