| 研究概要 |
腎移植患者33人に生じた、疣贅病変(common wart,pigmented wart,flat wart,plantar wart,cutaneous horn)55例について、発症年齢、発症部位、臨床像、病理組織像、薬剤歴を検討した。次に凍結組織検体55例をprotenase K処理後、phenol/chloroform/isoamylalcoholで全DNAを抽出した。さらに吸光度を用いて、DNA濃度を測定した。
HPV DNAの検出と遺伝子型の決定
各々の検体から抽出した全DNAのうち、100ngをtemplate DNAとし、HPVのopen reading frame L1領域を増幅するprimer(CP65/70,HVP2/B5,F9/B5,F10/B5,F12/B5,F12/B6,F22/B11)を用いて、PCR産物の検出を試みた。その結果、約90%にPCR産物を認めた。今後、得られたPCR産物を精製し、TA-cloningを行う。さらに得られたクローニングDNAについてchain terminator法にてシークエンス解析をを行い、HPVの型を明らかにしたい。
E6,E7蛋白の発現状況と局在の検討
各々のHPV陽性疣贅病変のパラフィン切片において、ABC法でE6,E7蛋白に対する抗体を用いて、HPV DNAのoncogeneであるE6,E7蛋白の発現状況と局在を検討する予定である。
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