| 研究概要 |
皮膚T細胞リンパ腫治療目的に投与されたretinoid X receptor(RXR)選択的リガンドが下垂体TSHの合成をヒトTSHβサブユニット遺伝子プロモーター領域に存在すると予測されるnegative regulatory elementを介して転写レベルで直接抑制することにより二次性甲状腺機能低下症が引き起こすことが報告された。しかし、レチノイドが視床下部TSH放出ホルモン(thyrotropin-releasing hormone;TRH)の合成、分泌に及ぼすか否か不明であり、生体内でLGD346がTSHβ遺伝子に対する作用のみならず視床下部TRH遺伝子の発現を直接抑制することによって三次性甲状腺機能低下症をきたす可能性も考えられる。本研究では、まず初めにall-trans-retinoic acid(atRA)ならびに9-cis-RAの視床下部TRH合成に及ぼす影響を検討した。8週齢雄マウスに100μg/kgのall-trans-RAないしは9-cis-RAを14日間腹腔内投与後、血中TSHならびtotal T4レベルをRIA法で測定し、下垂体TSHβ mRNAならびに前視床下部TRH mRNAをNorthern blot法にて解析した。陽性コントロール群として100μg/kgのtriiodothyronine(T3)を3日間投与した群について同様に解析した。その結果、atRA群において、有意なTSHならびにT4値の低下を認めた。更に、同群において下垂体TSH mRNAならびに前視床下部TRH mRNAレベルにも有意な減少が認められた。9-cis-RA群においても同様に減少傾向を認めたが、有意差を認めなかった。一方、atRA群のTSH、T4の減少はT3群に比較して弱かった。
現在、視床下部preproTRH mRNAの変化を更に詳細にin situ hybridization法にて解析中である。次に、私達がクローニングしたヒトTRH遺伝子プロモーターをルシフェラーゼレポーターに接続したプラスミドをリン酸カルシウム法にてCV-1細胞に遺伝子導入し、そのプロモーター活性に及ぼすatRAの影響を検討した。-900/+51,-500/+51,-170/+51の3種類のコンストラクトにおいてRARのコトランスフェクションにより、プロモーター活性が刺激され、100μM atRA添加によりプロモーター活性が抑制された。RXRのコトランスフェクションはプロモーター活性を増強したが、9-cis-RAによる抑制効果を認めなかった。現在、更に詳細にnegative retinoid response element(nRRE)の同定を行っている。
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