研究概要 |
(目的)Antisense cyclin D1(CyD1)を用いた消化器癌遺伝子治療の臨床応用のためには,いろいろの遺伝子異常背景をもった多数の癌細胞株を用いた検定が必須である。 (検討項目と結果) A.癌細胞のCyD1量,遺伝子異常背景についての検討 大腸癌細胞株5種類,肝癌細胞株4種類について,RT-PCR法でCyD1 mRNA発現を,western blot法で蛋白量を検討した。またp53,K-ras,APC,beta-cateninの遺伝子背景について検討した。 B.Adenovirus発現系の構築 Simplified adenovirus transfer system(PNAS;95:2509-2514,1998)を用いて,感染により各種細胞株にantisense CyD1 mRNAを発現させる系を確立する。(進行状況)pcDNA3-CyD1 plasmidより,CyD1cDNAを切り出し,adenovirus shattle vectorにantisense方向にsubcloningした。次に,adenovirus backbone vector(Easy1)とelectroporation法により特殊大腸菌の中で融合させ,recombinant AS CyD1 vectorを得た。同様に,遺伝子の組み込まれていないMock vector,およびGFPを発現するコントロールplasmid,GFP+antisense CyD1を発現するplasmidの作製が完了した。今後293細胞によってウイルス液を得て,生物学的効果判定の実験をすすめる。Antisense CyD1の生物学的効果検討としては,以下の項目を予定している。 血管新生,マトリックス分解,アポトーシス,細胞周期,接着因子, 運動・浸潤能,造腫瘍性
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