卵巣癌におけるリソフォスファチジン酸の診断的意義と治療標的への応用に関する研究

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12770909
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 古井 辰郎 岐阜大学, 医学部・附属病院, 助手 (00313883)
• キーワード: リソフォスファチジン酸(LPA) / 増殖因子 / 抗アポトーシス(生存因子) / PI-3kinase / MPA kinase

研究概要

卵巣癌等に対する強力な増殖因子であるリソフォスファチジン酸は、同時に細胞に対する生存(抗アポトーシス)因子である可能性が示唆されてきた。そこで、マウス、ラット線維芽細胞株を用いを無血清状態で培養することで飢餓状態により誘導されたアポトーシスに対し、LPAがこれを用量依存性に抑制することを示した(最高40μMで50〜70%の抑制)。同時にこの抗アポトーシス効果とLPAによる増殖効果が共に百日咳毒素(PTX)によって強力に抑制されることを示しLPAのG蛋白共有受容体を介する反応である可能性を示した。具体的には、アポトーシスの定量には、細胞のDNAを予め[^3H]Thymidineによって標識し、アッセイ後の細胞よりDNAを抽出し、遠心分離により断片化したDNAを非断片化DNAより分離しその放射活性測定した(DNA fragmentation assay)。増殖活性の測定は、[^3H]Thymidineの取り込みにより測定し、LPAが用量依存性に[^3H]・チミジンの取込みを亢進し、45μMのLPAがコントロールに比べ、約400%の亢進を認めた。これらの実験系で、PTXがDNA fragmentationとDNA合成において、LPAの作用をほぼ完全に抑制した。
この抗アポトーシス効果はAKT/PKBの燐酸化による活性化によるPhosphatidyl inositol 3 kinase(PI3K)を介することを、ウエスタンブロッティングとDNA fragmentation assayを用い、PI3K inhibitorであるLY294002を添加する事によって示した。さらに同様の実験系を用い、この抗アポトーシス作用には、LPAの細胞増殖効果に必要なMAPkinase(MAPK/ERK)のリン酸化による亢進も必要で、この経路にはPI3Kが関与していないことも同時に示した。

研究成果

• [文献書誌] Fang,X.,Furui,T. et al: "Lysophosphatidic acid prevents apoptosis in fibroblasts via Gi-protein-mediated activation of mitogen-activated protein kinase"Biochem J. 352・Pt1. 135-143 (2000)
• [文献書誌] Imai,A.,Furui,T. et al: "A gonadotropin-releasing hormone-responsive phosphatase hydrolyses lysophosphatidic acid within the plasma membrane of ovarian cancer cells"J Clin Endocrinol Metab. 85・9. 3370-3375 (2000)
• [文献書誌] Fang,X.,Furui,T. et al.: "Lysophospholipid growth factors in the initiation, progression, metastases, and management of ovarian cancer"Ann N Y Acad Sci. 905. 188-208 (2000)
• [文献書誌] Lu,Y.,Furui,T. et al.: "Ovarian Cancer 6"ISIS Medical Media, Oxford, UK. 472 (2000)