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(1)RED5の標的蛋白質の同定
網膜の分化発達過程において、一時的に発現している新規遺伝子をDifferential Display法を用いてクローニングし、RED5(仮称)と命名し、in situ hybridizationで網膜での発現を確認した。この新規遺伝子の網膜における機能は不明である。RED5の機能を明らかにするために、RED5をプローブとして、酵母のTwo-hybrid法を用いてRED5に結合する蛋白質の遺伝子の断片を検索したところ、既知の遺伝子が1つと未知の遺伝子が1つスクリーニングされた。
(2)既知の遺伝子について
既知の遺伝子配列からプライマーを設計し、PCRをかけたところ、既知の遺伝子の全長がクローニングされた。これを発現ベクターに導入し、COS細胞に発現させたところ、発現が確認された。現在、RED5と結合するか、in vitroとin vivoで確認中である。また、この既知の遺伝子が網膜切片のどの部位に発現しているかin Situ Hybridizationを用いて確認中である。
(3)未知の遺伝子について
未知の遺伝子の全長をhybridization法を用いて、クローニング中である。それと未知の遺伝子の断片を発現ベクターに導入し、COS細胞に発現させたところ、発現が確認された。現在、この遺伝子の断片による未知の蛋白質とRED5と結合するか、in vitroとin vivoで確認中である。
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