| 研究課題/領域番号 |
12877006
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
福士 靖江 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20125644)
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| 研究分担者 |
丸山 芳夫 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (00133942)
加藤 一郎 富山医科薬科大学, 助教授 (50250741)
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| キーワード | CD38ノックアウトマウス / capacitative Ca2+entry / submandibular acinar cell / acetylcholine / cyclic ADP-ribose / ryanodine / xestospongin C / IP3 |
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| 研究概要 |
外分泌腺細胞におけるcADPRの生理的重要性を見る事を主眼とし、平成13年度は顎下腺にてCa流入でのcADPRの役割を検討した。外分泌腺のCa流入は小胞体のCaが枯渇すると活性化される。CaプールはIP3とryanodine感受性の2種存在する。Ca流入における各プールの役割を見る為にCD38ノックアウトマウス(KO)を用いてACh刺激に応答するプールの分離・再構築を行った。細胞内のcADPRは存在しACh刺激で更に増加したが、KOでは検出されなかった。細胞内IP3量は刺激により増加し両タイプでの差はなかった。外液Caはそれらの産生に影響しなかった。パッチクランプ法によりCa machineryは両タイプに差がないことが分かった。外液無Ca下での正常のACh濃度-反応曲線は2相生で、低濃度側では緩やかで(第一相)100nMを境として急峻な勾配に変化した(第2相)。KOの第1相は正常と似ていたが第2相を欠いていた。これは第1相はIP3感受性プールからのCa放出、第2相ではryanodine感受性プールからの放出が加わる事を示唆する。外液Ca下で曲線は1相性になりKOも正常と一致した。外液Ni下では無Caの結果を再現した。外液無Ca下でACh高濃度刺激後KOは正常に比べ大きい流入を示し、再度刺激による反応は増加し正常と似たものになった。ryanodine処理細胞ではKOの結果を再現した。低濃度ACh刺激によるCa流入は両タイプに差はなかった。Xestospongin C処理ではAChの濃度に拘わらず流入は抑制された。以上の結果によりiCa流入はIP3感受性プールの枯渇に依存して増大するが、ryanodine感受性プールの枯渇が更に加わっても大きな影響はない。しかしryanodine感受性プールからのCa放出が阻害されるとCa流入は顕著な増加をする事が分かった。
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