| 研究概要 |
我々はチトクロームP450(CYP)の1分子種であるCYP2A6が4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone(NNK)などのたばこ煙中のがん原性N-ニトロソアミン類を代謝的に活性化すること,および喫煙歴を有する肺がん患者においてCYP2A6の遺伝子多型である全欠損型変異を有するヒトの頻度が対照と比較して有意に低いことを明らかにした.これらの事実から,CYP2A6がたばこ煙中のN-ニトロソアミン類を変異原活性化し,肺がんを誘発する可能性が示唆された.したがって,CYP2A6が上述のN-ニトロソアミン類を代謝的に活性化するか否かをin vivoで検討することは非常に重要である.そこで本研究ではヒトCYP2A6 cDNAを導入したトランスジェニックマウスを樹立し,CYP2A6がたばこ煙中のN-ニトロソアミン類を変異原活性化し,発がんに寄与しているか否かをin vivoで解明することを目的とした.トランスジェニックマウスは,遺伝子の過剰発現を通じて生体機能を解析するための実験系として確立された.その特徴は異なった動物の遺伝子を発現することが可能なことである.また,導入遺伝子以外の全ゲノムの働きは正常とみなせるので,導入遺伝子による生体全体の反応を知ることができる.トランスジェニックマウスを作出する際の導入遺伝子はタンパク質に翻訳される領域だけでなく,プロモーター,エンハンサー,インスレーターおよびpoly(A)付加シグナルを配置する必要がある.そこで,まずCYP2A6の開始コドンからpoly(A)付加シグナルまでを含むCYP2A6 cDNAの全長を単離し,プロモーター,エンハンサーおよびインスレーターが導入された発現プラスミドを構築した.続いて,断片化した発現プラスミドを受精卵へ注入した後,偽妊娠マウスへ移植した.誕生したマウスの尾からゲノムDNAを抽出し,PCR法にて導入遺伝子を検出した.現在,Fl世代を得るため,導入遺伝子が検出されたマウスを野生型マウスと交配している.
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