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本研究の目的はFF-Rap受容体アッセイを開発し、神経形成に関わる事が想定される新規遺伝子Doctorの機能を明らかにする事にある。初年度では作成したコンストラクトとラパマイシンを用いて表現型を観察したところ、FF-Rap受容体アッセイが働いている事が機能解析の結果明らかになった。この結果が目的のシグナルを介した故に得られている事をWestern blotting法により確認したところ、下流因子がリン酸化されており、この手法が生化学的にも機能している事を明らかにした。
また、本研究のもう1つの目的である新規遺伝子Docの解析については初年度で機能解析と発現解析、またはそれら組み合わせによりDocが神経形成に関わっている事が示唆されていた。そこで、神経形成において非常に重要な役割を有しているChdまたはBMPシグナルに注目し、DocとそれぞれのmRNAの共顕微注入を行い表現型を解析した。BMPリガンドをアンタゴナイズする事により神経化を導くChd mRNAを単独で顕微注入した際には異所的な二次軸を誘導するのに対して、Doc mRNAと共注入した際にはChdによる二次軸形成を阻害するPro-BMPの働きを示した。一方で、BMP mRNAを単独で胚に顕微注入した際には胚が腹側化するのに対して、Doc mRNAと共注入した際には頭部までは誘導する事ができないが、腹側化した胚を回復させるAnti-BMPの働きを有する事が確認された。以上の機能解析の結果、DocはPro-BMP、そしてAnti-BMPと言う両方の機能の有している事を明らかにした。
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