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2014 年度 実績報告書

卵子が精子をエンドサイトーシスにより取りこむ過程の解析

研究課題

研究課題/領域番号 12J09656
研究機関千葉大学

研究代表者

大和屋 健二  千葉大学, 医学研究院, 特別研究員(PD)

研究期間 (年度) 2012-04-01 – 2015-03-31
キーワード受精 / 先体反応 / 脱凝縮
研究実績の概要

配偶子膜融合から精子頭部が脱凝縮する過程でエクアトリンタンパク質と相互作用するタンパク質を同定すために精子タンパク質を可溶化する条件の最適化を行った。受精を阻害しない抗エクアトリン抗体EQ70-83を用いて免疫共沈降し質量解析を行なった結果、先体膜タンパク質や膜裏打ちタンパク質、プロテアソーム関連タンパク質を同定することができた。現在、エクアトリンノックアウトマウスや緑色蛍光タンパク質EGFPタグをつけたエクアトリンタンパク質を発現するトランスジェニックマウスを用いて解析を進めている。
受精過程の解析のなかでエクアトリンタンパク質は先体反応過程で翻訳後修飾を受けることを発見した。エクアトリンタンパク質を基質としてエクアトリンタンパク質の分子量変化を指標にその酵素の精製条件を検討した結果、その酵素の活性を保ったまま可溶化してくることができた。現在、同定に向けた精製を行ってる。
精子・卵子膜融合後のライブイメージング解析の結果、緑色蛍光タンパク質EGFPタグをつけたエクアトリンタンパク質の挙動を抗体によらない方法で追うことができた。解析をin vitroで行うために卵を用いない方法で精子頭部の脱凝縮を起こさせ比較を行っている。
受精過程のライブイメージングを最適化する目的で行っていた精子先体反応の解析の結果、各種精子先体タンパク質の挙動と翻訳後修飾変化を詳細にに追うことができるようになった。(現在論文投稿中)

現在までの達成度 (段落)

26年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

26年度が最終年度であるため、記入しない。

  • 研究成果

    (11件)

すべて 2015 2014

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (10件)

  • [雑誌論文] Analysis of the complexity of the sperm acrosomal membrane by super-resolution stimulated emission depletion microscopy compared with transmission electron microscopy2014

    • 著者名/発表者名
      Ito C., Yamatoya K., Toshimori K.
    • 雑誌名

      Microscopy

      巻: e-pub ahead of print ページ: e-pub

    • DOI

      doi: 10.1093/jmicro/dfu101

    • 査読あり
  • [学会発表] Searching the enzyme responsible for molecular weight reduction of sperm acrosomal protein Equatorin during acrosome reaction2015

    • 著者名/発表者名
      Yamatoya K., Ito C., Maekawa M., Hatano M., Toshimori K.
    • 学会等名
      Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
    • 発表場所
      Kobe Convention Center (Kobe, Hyogo, Japan)
    • 年月日
      2015-03-22
  • [学会発表] Sperm acrosomal membrane complex analyzed by STED using Equatorin-EGFP transgenic mice2015

    • 著者名/発表者名
      Ito C., Yamatoya K., Maekawa M., Toshimori K.
    • 学会等名
      Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
    • 発表場所
      Kobe Convention Center (Kobe, Hyogo, Japan)
    • 年月日
      2015-03-22
  • [学会発表] Basigin interacts with monocarboxylate transporter 2 in the mouse testes and sperm2015

    • 著者名/発表者名
      Maekawa M., Cheng C., Yamatoya K., Ito C., Toshimori K.
    • 学会等名
      Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
    • 発表場所
      Kobe Convention Center (Kobe, Hyogo, Japan)
    • 年月日
      2015-03-22
  • [学会発表] Equatorin-mediated sperm-egg interaction2015

    • 著者名/発表者名
      Toshimori K., Ito C., Yamatoya K.
    • 学会等名
      Proceedings of the 120th Annual Meeting of The Japanese Association of Anatomists and the 92nd Annual Meeting of The Physiological Society of Japan
    • 発表場所
      Kobe Convention Center (Kobe, Hyogo, Japan)
    • 年月日
      2015-03-21
  • [学会発表] SPESP1 ノックアウトマウスの先体反応に伴う先体タンパク質の局在と分子量変化2014

    • 著者名/発表者名
      大和屋健二、伊藤千鶴、年森清隆
    • 学会等名
      第59回日本生殖医学会学術講演会
    • 発表場所
      京王プラザホテル(東京都・新宿区)
    • 年月日
      2014-12-04 – 2014-12-05
  • [学会発表] ODF2 isoform c の発現と運命2014

    • 著者名/発表者名
      伊藤千鶴、大和屋健二、年森清隆
    • 学会等名
      第59回日本生殖医学会学術講演会
    • 発表場所
      京王プラザホテル(東京都・新宿区)
    • 年月日
      2014-12-04 – 2014-12-05
  • [学会発表] ヒト精子ミトコンドリアの形態異常と不妊症2014

    • 著者名/発表者名
      年森清隆、伊藤千鶴、大和屋健二
    • 学会等名
      第59回日本生殖医学会学術講演会
    • 発表場所
      京王プラザホテル(東京都・新宿区)
    • 年月日
      2014-12-04
  • [学会発表] Analyses of sialylation status of sperm acrosomal protein Equatorin and enzyme responsible for molecular weight shift during acrosome reaction2014

    • 著者名/発表者名
      Yamatoya K., Ito C., Hatano M., Toshimori K.
    • 学会等名
      The 37th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan
    • 発表場所
      Pacifico Yokohama (Yokohama, Kanagawa, Japan)
    • 年月日
      2014-11-27
  • [学会発表] Sperm ODF2: analysis using ODF2-EGFP transgenic mice2014

    • 著者名/発表者名
      Toshimori K., Ito C., Yamatoya K.
    • 学会等名
      18th International Microscopy Congress
    • 発表場所
      Prague Congress Center (Prague, Czech Repblic)
    • 年月日
      2014-09-07 – 2014-09-12
  • [学会発表] 精子頭部のキャパシテーションと先体反応2014

    • 著者名/発表者名
      年森清隆、伊藤千鶴、大和屋健二
    • 学会等名
      日本アンドロロジー学会第33回学術大会 第20回精子形成・精巣毒性研究会
    • 発表場所
      軽井沢プリンスホテルウエスト(長野県・軽井沢町)
    • 年月日
      2014-06-12

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公開日: 2016-06-01  

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