2002 年度実績報告書

情報伝達に関わる膜タンパク質(GPCRとイオンチャネル)の構造研究

研究課題

研究課題/領域番号	13001003
研究機関	京都大学
研究代表者	藤吉好則京都大学, 大学院・理学研究科, 教授 (80142298)
研究分担者	宮澤淳夫理化学研究所, 生体マルチソーム研究チーム, 連携研究員 (60247252) 佐藤主税産業技術総合研究所, 構造生理研究G, 主任研究員土井知子日本電子株式会社, 基礎研究部, 主任研究員
キーワード	水チャネル / アクアポリン-4 / ニコチン性アセチルコリン受容体 / IP_3受容体 / コネキシン / エンドセリン受容体 / Caveolin / 電子線結晶学
研究概要	1)グリア細胞に存在する水チャネルアクアポリン-4の構造を解析するために、昆虫細胞Sf9を用いて大量発現し、精製した。Sf9細胞の6リッターカルチャーから10mgのアクアポリン-4が精製できるようになったので、これを用いて2次元結晶を作製する条件を検討できるようになった。その結果、3Åを超える分解能の電子線解説図形が撮影できるような2次元結晶が作製できた。 2)電気エイの発電器官から作製されたニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)のチューブ状結晶を極低温電子顕微鏡で撮影して、立体構造解析を行って、nAChRの4.5Å分解能の解析とX線結晶学により解析されたアセチルコリン結合蛋白質の分子構造の比較から、リガンド結合に伴い、この受容体の2つのαサブユニットの内側のβバレルが15度程度回転するという構造変化の機構を解明したが、引き続き分解能を向上させて、4Å分解能での解析から、原子モデルを作製した。この結果はNatureに(Articleとして)投稿した。 3)IP_3受容体の立体構造を、極低温電子顕微鏡と単粒子解析法を用いて解析した。 4)ギャップジャンクションにおいて、聴覚障害の原因として知られるコネキシン26の変異体の解析を行い、J.Biol.Chem.に発表した。 5)ヒトエンドセリン受容体B型とカベオリン1との相互作用を研究して、ヒトエンドセリン受容体B型におけるシグナル伝達の制御機構を解明して、EJBに発表した。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] 入江克雅: "Crystal structure of Homer 1 family conserved region reveals the interaction between EVH1 domain and own praline-rich motif"Journal of Molecular Biology. 318. 1117-1126 (2002)
[文献書誌] 岡田哲二: "Functional role of internal water molecules in rhodopsin revealed by x-ray crystallography"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 5982-5987 (2002)
[文献書誌] Nigel Unwin: "Activation of the Nicotinic acetylcholine receptor involves a switch in conformation of the subunits"Journal of Molecular Biology. 319. 1165-1176 (2002)
[文献書誌] 廣明洋子: "A new technique to co-localise membrane proteins with Homer/vesl"BBRC. 295. 756-765 (2002)
[文献書誌] Peter Agre: "Aquaporin water channels-from atomic structure to clinical medicine"Journal of Physiology. 542.1. 3-16 (2002)
[文献書誌] 藤吉好則: "Structure and function of water channels"Current Opinion in Structural Biology. 12. 509-515 (2002)
[文献書誌] 大嶋篤典: "Roles of Met-34, Cys-64, and Arg-75 in the Assembly of Human Connexin 26"Journal of Biological Chemistry. 278. 1807-1816 (2003)
[文献書誌] 山口知宏: "Regulated Interaction of Endothelin B Receptor with Caveolin-1"European Journal of Biochemistry. (in the press). (2003)

2002 年度 実績報告書

情報伝達に関わる膜タンパク質(GPCRとイオンチャネル)の構造研究

研究代表者

藤吉 好則 京都大学, 大学院・理学研究科, 教授 (80142298)

研究成果

[文献書誌] 入江 克雅: "Crystal structure of Homer 1 family conserved region reveals the interaction between EVH1 domain and own praline-rich motif"Journal of Molecular Biology. 318. 1117-1126 (2002)

[文献書誌] 岡田 哲二: "Functional role of internal water molecules in rhodopsin revealed by x-ray crystallography"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 5982-5987 (2002)

[文献書誌] Nigel Unwin: "Activation of the Nicotinic acetylcholine receptor involves a switch in conformation of the subunits"Journal of Molecular Biology. 319. 1165-1176 (2002)

[文献書誌] 廣明 洋子: "A new technique to co-localise membrane proteins with Homer/vesl"BBRC. 295. 756-765 (2002)

[文献書誌] Peter Agre: "Aquaporin water channels-from atomic structure to clinical medicine"Journal of Physiology. 542.1. 3-16 (2002)

[文献書誌] 藤吉 好則: "Structure and function of water channels"Current Opinion in Structural Biology. 12. 509-515 (2002)

[文献書誌] 大嶋 篤典: "Roles of Met-34, Cys-64, and Arg-75 in the Assembly of Human Connexin 26"Journal of Biological Chemistry. 278. 1807-1816 (2003)

[文献書誌] 山口 知宏: "Regulated Interaction of Endothelin B Receptor with Caveolin-1"European Journal of Biochemistry. (in the press). (2003)

2002 年度実績報告書

藤吉好則京都大学, 大学院・理学研究科, 教授 (80142298)

[文献書誌] 入江克雅: "Crystal structure of Homer 1 family conserved region reveals the interaction between EVH1 domain and own praline-rich motif"Journal of Molecular Biology. 318. 1117-1126 (2002)

[文献書誌] 岡田哲二: "Functional role of internal water molecules in rhodopsin revealed by x-ray crystallography"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 5982-5987 (2002)

[文献書誌] 廣明洋子: "A new technique to co-localise membrane proteins with Homer/vesl"BBRC. 295. 756-765 (2002)

[文献書誌] 藤吉好則: "Structure and function of water channels"Current Opinion in Structural Biology. 12. 509-515 (2002)

[文献書誌] 大嶋篤典: "Roles of Met-34, Cys-64, and Arg-75 in the Assembly of Human Connexin 26"Journal of Biological Chemistry. 278. 1807-1816 (2003)

[文献書誌] 山口知宏: "Regulated Interaction of Endothelin B Receptor with Caveolin-1"European Journal of Biochemistry. (in the press). (2003)