2001 年度実績報告書

中枢神経系の局所神経回路を解析する遺伝子工学ツールの開発

研究課題

研究課題/領域番号	13035026
研究種目	特定領域研究(A)
研究機関	京都大学
研究代表者	金子武嗣京都大学, 医学研究科, 教授 (90177519)
研究分担者	瀧公介京都大学, 医学研究科, 特別研究員
キーワード	中枢神経系 / 局所神経回路 / 投射ニューロン / インターニューロン / トランスジェニックマウス / ウィルスベクター / ゴルジ染色様標識 / 細胞内染色
研究概要	1.大脳皮質出力ニューロンを逆行性に細胞体・樹状突起をGolgi染色様に標識する方法により、前もって出力ニューロンを標識したラットの大脳皮質スライス標本を作成した。微小ガラス電極を各層のニューロンに刺入し、基本的な電気的性質を記録してニューロンを分類し、Biocytinを注入した。スライス標本を固定した後、組織学的な検索として免疫蛍光法を用いてBiocytinを注入したニューロンが興奮性あるいは抑制性であるか検討した。次に、Biocytinを注入したニューロンと特にその出力である神経軸索をAvidin-biotinylated peroxi-dase complex法によって青黒色に染色し、逆行性に標識された出力ニューロンの樹状突起をPeroxidase anti-peroxi-dase酵素免疫染色法で赤く染色し、1個のニューロンから一群の大脳皮質投射ニューロンへの連絡を調べた。その結果、興奮性のIII層錐体ニューロンの出力はV層の皮質脊髄投射錐体ニューロンへ多く入力しているが、VI層の皮質視床投射錐体ニューロンへはその4分の1しか入力していないことを見出し報告した。さらに、VI層の錐体ニューロンへの入力を調べII/III層及びV層の錐体ニューロンからの入力は少ないが、IV層・VI層からの入力が多いことを見いだしており、報告をまとめている。 2.中枢神経系の投射ニューロンをアデノウィルスベクターあるいはSindbis virusベクターに感染させ、膜移行シグナルを導入したGreen fluorescent protein(pGFP)を発現させ、Golgi染色様に標識することに成功した。 3.GABA作動性のインターニューロンをGolgi染色様に染色する手法を、トランスジェニックマウスを利用して作ろうとしている。現在、GABAニューロンのマーカーであるParvalbuminとCalretininというカルシウム結合タンパク質の遺伝子をBACを用いてクローニングしている。Calretininトランスジェニックマウスは作成済みで、pDFPの発現特異性を検討している。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Takeshi Kaneko: "Immunohistochemical localization of candidates for vesicular glutamate transporters in the rat brain"The Journal of Comparative Neurology. 444. 39-62 (2002)
[文献書誌] Takahiro Furuta: "In vivo transduction of central neurons using recombinant Sindbis virus: Golgi-like labeling of dendrites and axons withmambrane-targeted fluorescent proteins"The Journal of HIstochemistry & Cytochemistry. 49. 1497-1507 (2001)
[文献書誌] Nobuaki Tamamaki: "Radial glia is a progenitor of neocortical neurons in the developing cerebral cortex"Neuroscience Research. 41. 51-60 (2001)
[文献書誌] Fumino Fujiyama: "Immunocytochemical localization of candidates for vvesicular glutamate transporters in the rat cerebral cortex"The Journal of Comparative Neurology. 435. 379-387 (2001)
[文献書誌] Kazuhiro Nakamura: "Prostaglandin EP3 receptor protein in serotonin and catecholamine cell groups: A double immunofluorescence study in the rat brain"Neuroscience. 103. 763-775 (2001)
[文献書誌] Nobuaki Tamamaki: "Cell migration from the corticostriatal angle to he basal telencephalon in rat embryos"NeuroReport. 12. 775-780 (2001)

2001 年度 実績報告書

中枢神経系の局所神経回路を解析する遺伝子工学ツールの開発

研究代表者

金子 武嗣 京都大学, 医学研究科, 教授 (90177519)

研究成果

[文献書誌] Takeshi Kaneko: "Immunohistochemical localization of candidates for vesicular glutamate transporters in the rat brain"The Journal of Comparative Neurology. 444. 39-62 (2002)

[文献書誌] Takahiro Furuta: "In vivo transduction of central neurons using recombinant Sindbis virus: Golgi-like labeling of dendrites and axons withmambrane-targeted fluorescent proteins"The Journal of HIstochemistry & Cytochemistry. 49. 1497-1507 (2001)

[文献書誌] Nobuaki Tamamaki: "Radial glia is a progenitor of neocortical neurons in the developing cerebral cortex"Neuroscience Research. 41. 51-60 (2001)

[文献書誌] Fumino Fujiyama: "Immunocytochemical localization of candidates for vvesicular glutamate transporters in the rat cerebral cortex"The Journal of Comparative Neurology. 435. 379-387 (2001)

[文献書誌] Kazuhiro Nakamura: "Prostaglandin EP3 receptor protein in serotonin and catecholamine cell groups: A double immunofluorescence study in the rat brain"Neuroscience. 103. 763-775 (2001)

[文献書誌] Nobuaki Tamamaki: "Cell migration from the corticostriatal angle to he basal telencephalon in rat embryos"NeuroReport. 12. 775-780 (2001)

2001 年度実績報告書

金子武嗣京都大学, 医学研究科, 教授 (90177519)