神経シナプスにおけるエンドサイトーシスの変化を指標とした神経変性疾患の解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13035032
• 研究種目: 特定領域研究(A)
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 竹居 孝二 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (40322226)
• 研究分担者: 山田 浩司 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (80325092) ; 絹田 正裕 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 講師 (40135942)
• キーワード: 脳 / 神経 / Klotho / エンドサイトーシス / 脈絡叢 / 老化

研究概要

老化モデルマウスとしてKlotho変異マウス(京大、鍋島陽一教授より供与)を用いて、脳を以下の解析をおこなった。
1.Klotho変異マウス脳の変化
Klotho変異マウス脳の変化を神経シナプスを中心に精査した。まず、シナプス小胞のマーカーであるSynaptophysinの特異的抗体を用いた蛍光免疫染色法により、海馬CA3領域においてSynaptophysinの発現が軽度に減少することを見い出した。次に、Klotho変異マウスのシナプスの機能的変化を検出するため、シナプスエンドサイトーシスに機能する蛋白(Clathrin、AP2、Dynamin、Amphiphysinなど)の発現と局在をそれぞれウエスタンブロッティング法、蛍光免疫染色法により調べた。その結果、Klotho変異マウス海馬領域ではDynaminの発現が軽度減少がみられた。他のタンパクについては顕著な変化はみられなかった。
2.Klothoタンパクの局在
KlothoのmRNAは脳、腎、精巣において検出されることが知られている。これらの臓器におけるKlothoタンパクの局在を、抗Klotho抗体(協和発酵より供与)を用いた蛍光免疫染色法により調べた。脳では脈絡叢に、腎では遠位尿細管に、精巣では精細胞に発現がみられた。特に脈絡叢では上衣細胞のapical側(脳室側)に選択的に局在していた。

研究成果

• [文献書誌] M.Kinuta: "Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate stimulates vesicle formation from liposomes by brain cytosol"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 2842-2847 (2002)
• [文献書誌] K.Farsad: "Generation of high curvature membranes mediated by direct endophilin-bilayer interactions"J.Cell Biol.. 155. 193-200 (2001)
• [文献書誌] Y.Nemoto: "Characterization of synaptojanin 2B isoforms expressed in brain and tests"J. Biol. Chem.. 276. 41133-41142 (2001)
• [文献書誌] K.Takei: "Clathrin-mediated endocytosis : membrane factors pull the trigger"Trends in Cell Biol.. 11. 385-391 (2001)
• [文献書誌] H.Yamada: "Norepinephrine-evoked 5 -Hydroxytryptamine secretion is Ca^<2+> dependent and mediated through exocytosis in rat pinealocytes"J. Neurochem. (印刷中). (2002)
• [文献書誌] M.Kinuta: "Determination of S-[2-carboxy-1-(1H-imidazol-4-yl) ethyllglutathione, a novel metabolite of L-histidine, in tissue extracts from sunlight-irradiated rat by capillary electrophoresis"Electrophoresis. 22. 3365-3370 (2001)