| 研究概要 |
本研究では50KTのGINVに対する特異的抵抗性機構を明らかにする目的で、GINVとACLSVのMP間の相互作用に着目し,先ずGINVのMPを、50KTおよび非形質転換植物(NT)でトランジエントに発現させ,GINV-MPの(1)細胞内分布様式,(2)プロトプラスト表面でのチュープル構造形成能、(3)細胞間移行能,(4)プラズモデスマータへの局在が,50KT細胞において阻害されるかどうかを解析した。
(1)3種ウイルス(GINV, ACLSVおよびASGV)のMPとGFPの融合タンパク質を発現するコンストラクトを構築し,56KTおよびNTの表皮細胞とプロトプラストでトランジエントに発現させて,各MPの細胞内分布を調べたところ,ACLSVとASGVのMPは両植物の細胞表面付近でネットワーク状に分布したが,GINV-MPは50KT細胞では大きな蛍光集塊を形成した。(2)GINV-MPを,NTから単離したプロトプラストで発現させると,プロトプラスト表面にチューブル構造が多数形成された。一方,50KTから分離したプロトプラストではチューブルの形成が著しく阻害された。ACLSVとASGVのMPを発現した場合には、50KTとNTのプロトプラスト間でチュープル形成に差は認められなかった。(3)各ウイルスのMP-GFPをパーティクルガン法により表皮細胞に導入した。ACLSVとASGVのMPは、50KTとNTの両植物の組織で、一次発現細胞から周辺細胞に広範囲に細胞間移行し,それら細胞のプラズモデスマータに局在した。これに対して,GINV-MPはNT植物では細胞間移行したが,50KTの表皮細胞では移行が著しくに阻害された。(4)GINVとACLSV, GINVとASGV, ACLSVとASGVの3つの組み合わせで,2種ウイルスのMPをNT表皮細胞で同時に発現させたところ,GINVとACLSVの組み合わせでのみ,両MPの細胞間移行が阻害された。この阻害は、MPのmRNAによるものではなく、タンパク質自体によるものであった。
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