| 研究概要 |
細胞周期の進行にはサイクリン・Cdk複合体が中心的な役割を果たすが、その活性を細胞の増殖、あるいは、分化の制御につなげる機構については未だ多くのことが未解決である。我々はCdk結合タンパク質であるCDK阻害因子、Ceb1,Ciz1の機能の解析を進めている。CDK阻害因子について、これまでに、骨芽細胞の分化過程の制御においてp27CDK阻害因子の類似蛋白であるP57が重要であることを明らかにしてきたが、本年度はさらに、骨芽細胞内でp57の制御に関わるタンパクをyeast two-hybrid法で検索した結果、LIM kinase-1が結合することが明らかにした。LIM kinase-1はGタンパク質によるシグナル伝達の下流でアクチンファイバーの形成を制御し、細胞骨格をコントロールする事が知られており、p57の発現はLIM kinase-1によるアクチンストレスファイバー形成の促進作用を阻害することを明らかにした。従って、p57はLIM kinase-1との結合を介して、細胞骨格の制御に関わることが明らかになった(投稿中)。Ceb1はサイクリンEと相互作用し、サイクリンE-CDK2によってリン酸化を受けるが、本年度はsiRNAによるCeb1機能の中和によってどのような最終表現型が得られるか検討を行った。Ceb1siRNAをおこなったHeLaS3細胞において、液胞を多数有する細胞が高頻度で観察された。電子顕微鏡によって液胞へのリボゾームの付着が認められたので、Ceb1siRNAによって誘導された液胞は粗面小胞体由来であることが強く示唆された。Ceb1類似タンパク質のRCC1様ドメインが、細胞内小胞輸送に関係するRabファミリーと相互作用するという報告を考えあわせると、今回の観察結果よりCeb1の細胞内小胞輸送への関与が強く示唆された。
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