2001 年度実績報告書

発作性失調症2型モデルマウスの作製と遺伝子治療の試み

研究課題

研究課題/領域番号	13210051
研究機関	東京医科歯科大学
研究代表者	三枝弘尚東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (90261205)
キーワード	Cav2.1チャネル / 発作性失調型2型 / ノックインマウス / 遺伝子治療
研究概要	本研究はP/Q型Caチャネルをコードするaipha1A遺伝子の変異に起因する発作性失調症2型(以下EA2)のモデルマウスの作製を目的とし、それを用いたEA2発症機序の解明およびその遺伝子治療法の開発を目指すものである。まず、すでに我々がクローン化した正常ヒト由来alpha1A cDNAにPCRを利用してEA2変異(C4110T, R1279がStopコドンになる)を導入した(EA2-alpha1A)。このEA2-alpha1A cDNAをマウスalpha1A遺伝子の内在性プロモーターで発現させることを目指し、Cre-lox系を利用してマウス胚幹細胞(ES細胞)のalpha1A遺伝子エクソン1に挿入することを試みた。これは、変異導入lox配列(lox71およびlox66)間のCreによる組換え反応は、本来の認識配列であるloxP-loxP間の組換え反応にくらべて逆反応が起こりにくいということに基づく方法で、染色体上の特定の位置に外来遺伝子を効率的に挿入できると考えられる。lox66,EMCV由来IRES, EA2-alpha1A cDNA, polyAシグナル、ハイグロマイシン耐性遺伝子カセット、を含むノックインベクターを作製し、これをマウスalpha1Aエクソン1にlox71配列が挿入されたES細胞(BI-176)にCre発現ベクターとともに導入した。その結果、ハイグロマイシン耐性株の約30%という高い効率で目的のEA2ノックインES細胞が得られた。そして常法に従いEA2ノックインマウスを作製した。また、親株であるBI-176細胞に導入した変異はalpha1A遺伝子のヌル変異であると期待されるので、EA2変異との比較を可能にするためBI-176由来マウスも作製した。現在はこれらのマウスの交配によりホモ接合体が得られることが判明した段階であり、今後それらの行動学的、病理学的な解析をすすめる予定である。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Kubota, M.: "Intact LTP and fear memory but impaired spatial memory in mice lacking Cav2.3(alpha1E) channel"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 282(1). 242-248 (2001)
[文献書誌] Saegusa, H.: "Suppression of inflammatory and neuropathic pain symptoms in mice lacking N-type Ca2+ channel"EMBO J.. 20(10). 2349-2356 (2001)
[文献書誌] Sakata, Y.: "Analysis of Ca2+ currents in spermatocytes from mice lacking Cav2.3 (alpha1E) Ca2+ channel"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 288(4). 1032-1036 (2001)
[文献書誌] Matsuda, Y.: "Mice lacking Cav2.3(alpha 1E) calcium channel exhibit hyperglycemia"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 289(4). 791-795 (2001)
[文献書誌] Toriyama, H.: "Role of Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ channel in ischemic neuronal injury"Neuroreport. 13(2). 261-265 (2002)
[文献書誌] Tsunemi, T.: "Novel Cav2.1 splice variants isolated from Purkinje cells do not generate P-type Ca2+ current"J. Biol. Chem.. 277(9). 7214-7221 (2002)
[文献書誌] Sakata, Y.: "Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ channel participates in the control of sperm function"FEBS lett.. (印刷中). (2002)
[文献書誌] Saegusa, H.: "Effects of ablation of N-and R-type Ca2+ channels on pain transmission"Neurosci Res.. (印刷中). (2002)

2001 年度 実績報告書

発作性失調症2型モデルマウスの作製と遺伝子治療の試み

研究代表者

三枝 弘尚 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (90261205)

研究成果

[文献書誌] Kubota, M.: "Intact LTP and fear memory but impaired spatial memory in mice lacking Cav2.3(alpha1E) channel"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 282(1). 242-248 (2001)

[文献書誌] Saegusa, H.: "Suppression of inflammatory and neuropathic pain symptoms in mice lacking N-type Ca2+ channel"EMBO J.. 20(10). 2349-2356 (2001)

[文献書誌] Sakata, Y.: "Analysis of Ca2+ currents in spermatocytes from mice lacking Cav2.3 (alpha1E) Ca2+ channel"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 288(4). 1032-1036 (2001)

[文献書誌] Matsuda, Y.: "Mice lacking Cav2.3(alpha 1E) calcium channel exhibit hyperglycemia"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 289(4). 791-795 (2001)

[文献書誌] Toriyama, H.: "Role of Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ channel in ischemic neuronal injury"Neuroreport. 13(2). 261-265 (2002)

[文献書誌] Tsunemi, T.: "Novel Cav2.1 splice variants isolated from Purkinje cells do not generate P-type Ca2+ current"J. Biol. Chem.. 277(9). 7214-7221 (2002)

[文献書誌] Sakata, Y.: "Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ channel participates in the control of sperm function"FEBS lett.. (印刷中). (2002)

[文献書誌] Saegusa, H.: "Effects of ablation of N-and R-type Ca2+ channels on pain transmission"Neurosci Res.. (印刷中). (2002)

2001 年度実績報告書

三枝弘尚東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (90261205)