2003 年度実績報告書

膜結合型増殖因子と受容体型チロシンキナーゼを介したがん細胞の浸潤制御機構

研究課題

研究課題/領域番号	13216057
研究機関	愛媛大学
研究代表者	東山繁樹愛媛大学, 医学部, 教授 (60202272)
研究分担者	佐々木卓也徳島大学, 医学研究科, 教授 (40241278)
キーワード	HB-EGF / shedding / repressor / PLZF / EGF family / metalloprotease
研究概要	HB-EGFのプロセシング後に細胞膜表面に残るHB-EGF-Cに何らかの機能があるかどうかを解析するため、HB-EGF-Cのプロセシング後の局在、ならびに結合タンパク質の同定を試みた。 HB-EGF-Cの細胞内局在を解析するためHB-EGFのC-末端をyellow fluorescent protein (YFP)に融合したHB-EGF-YFPをコードする遺伝子を作成し、ヒト繊維芽肉腫細胞株HT1080細胞に発現させた。HB-EGF-YFPは細胞膜表面に発現した。この細胞をHB-EGFプロセシング誘導剤であるフォルボールエステル(TPA)で処理し、その後のYFPの細胞内局在を顕微鏡下で経時的に観察した。その結果、TPA処理約30分後にYFP蛍光は細胞膜から核周辺に移動することが観察された。これと並行して、酵母two-hybrid法によりHB-EGF-Cに結合するタンパク質をスクリーニングしたところ、PLZFをコードする遺伝子断片をクローニングした。HB-EGF-CとPLZFの相互作用を検討するため、PLZFの遺伝子全長をクローニングし、HB-EGF,PLZFの両遺伝子をHT108Oに発現させた後、TPA処理前後でのHB-EGF-CとPLZFの結合を免疫沈降法により検討した。その結果、TPA処理後のみHB-EGF-CとPLZFの供沈が、HB-EGF-CおよびPLZFの双方の抗体により確認できた。さらにcyan fluorescent protein (CFP)に融合したPLF(CFP-PLZF)とHB-EGF-YFPの局在を同時に観察すると、HB-EGF-C-YFPの核移行後にCFP-PLZFの核外移行が観察された。以上のことから、HB-EGFのプロセシングにより産生されるHB-EGF-Cは核に移行し転写リプレッサーPLZFと結合しこれを核外に汲み出す反応を誘導することを明らかにした。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Nakano, N., Higashiyama, S., et al.: "The N-terminal region of NTAK/neuregulin-2 isoforms has an inhibitory activity of angiogenesis."J.Biol.Chem.. (in press). (2004)
[文献書誌] Sahin, U.H, Higashiyama, S., et al.: "Distinct roles for ADAM10 and 17 in ectodomain shedding of six EGFR-ligands."J.Cell Biol.. 164. 769-779 (2004)
[文献書誌] Nanba, D., Higashiyama, S., et al.: "Proteolytic release of the carboxy-terminal fragment of heparin-binding EGF-like Growth Factor causes nuclear export of PLZF."J.Cell Biol.. 163. 489-502 (2003)
[文献書誌] Mori, S., Higashiyama, S., et al.: "SH3-domain containing protein PACSIN3 binds Meltrin α/ADAM12 cytoplasmic domain and modulates ectodomain shedding of HB-EGF"J.Biol.Chem.. 278. 46029-46034 (2003)
[文献書誌] Iwamoto, R., Higashiyama, S., et al.: "HB-EGF and ErbB signaling is essential for heart function."Pro.Natl, Acad Sci.U.S.A.. 100. 3221-3226 (2003)
[文献書誌] Yamazaki, S.Higashiyama, S.et al.: "Mutant mice with defects in the ectodomain shedding of HB-EGF show sever abnormal development."J.Cell Biol.. 163. 469-475 (2003)

2003 年度 実績報告書

膜結合型増殖因子と受容体型チロシンキナーゼを介したがん細胞の浸潤制御機構

研究代表者

東山 繁樹 愛媛大学, 医学部, 教授 (60202272)

研究成果

[文献書誌] Nakano, N., Higashiyama, S., et al.: "The N-terminal region of NTAK/neuregulin-2 isoforms has an inhibitory activity of angiogenesis."J.Biol.Chem.. (in press). (2004)

[文献書誌] Sahin, U.H, Higashiyama, S., et al.: "Distinct roles for ADAM10 and 17 in ectodomain shedding of six EGFR-ligands."J.Cell Biol.. 164. 769-779 (2004)

[文献書誌] Nanba, D., Higashiyama, S., et al.: "Proteolytic release of the carboxy-terminal fragment of heparin-binding EGF-like Growth Factor causes nuclear export of PLZF."J.Cell Biol.. 163. 489-502 (2003)

[文献書誌] Mori, S., Higashiyama, S., et al.: "SH3-domain containing protein PACSIN3 binds Meltrin α/ADAM12 cytoplasmic domain and modulates ectodomain shedding of HB-EGF"J.Biol.Chem.. 278. 46029-46034 (2003)

[文献書誌] Iwamoto, R., Higashiyama, S., et al.: "HB-EGF and ErbB signaling is essential for heart function."Pro.Natl, Acad Sci.U.S.A.. 100. 3221-3226 (2003)

[文献書誌] Yamazaki, S.Higashiyama, S.et al.: "Mutant mice with defects in the ectodomain shedding of HB-EGF show sever abnormal development."J.Cell Biol.. 163. 469-475 (2003)

2003 年度実績報告書

東山繁樹愛媛大学, 医学部, 教授 (60202272)