2002 年度実績報告書

癌抑制遺伝子を長期間高レベルで発現する新規レトロウイルスベクターとその産生系

研究課題

研究課題/領域番号	13218022
研究機関	東京大学
研究代表者	伊庭英夫東京大学, 医科学研究所, 教授 (60111449)
研究分担者	伊藤太二東京大学, 医科学研究所, 助手 (60343109)
キーワード	遺伝子治療 / 再生医療 / レトロウイルスベクター / 癌抑制遺伝子 / Brm遺伝子 / クロマチン構造変換因子 / ジーンサイレンシング / ヒストンアセチル化
研究概要	レトロウイルスベクターは、各種幹細胞や個体に導入した場合、長期間の発現が維持できずに著しく低下する例があり遺伝子治療に使用する際に克服せねばならない大きな問題となっている。本研究ではこのようなgene silencingの分子機構の解析を広範に進めてこれに関わる宿主因子を同定しその機能を明らかにすることから開始し、クロマチン構造変換因子SWI/SNF複合体の触媒サブユニットの一つBrmがレトロウイルス発現維持のための重要な宿主因子であることを突き止めた。さらにその成果に基づいて個体や培養幹細胞において長期間安定して高レベルで発現できる新規レトロウイルスベクターを設計・作製をめざしそれに成功した。その具体的成果は以下のように要約できる。 1)レトロウイルスはBrmの発現を欠失する細胞株へも侵入し、逆転写、integration、及び遺伝子発現を正常に開始することができる。しかしその遺伝子発現は不連続でかつstochasticな激しいgene silencingを受ける。 2)このgene silencingはBrm遺伝子の導入により効率よく解除され、またHDAC阻害剤の添加によっても部分的に解除される。しかしDNAメチル化の阻害剤によっては一切解除されない。 3)プロウイルスの3'-LTR近傍では、Brm遺伝子の導入に伴い、ヒストンH4の特定のリジン残基(リジン5及びリジン8)のアセチル化が上昇し、同時にYY1、HDAC1、HDAC2、ヒストンH1の動員の減少が見られる。 4)このgene silencingは、YY1結合配列に変異を入れたウイルスベクターでは、解除され、実際にBRG1遺伝子の発現が見られないヒトEC細胞において、発現持続の能力が極めて優秀なベクターの作出に成功した。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Koike, C.et al.: "Introduction of wild-type patched gene suppresses the oncogenic potential of human squamous cell"Oncogene. 21. 2670-2678 (2002)
[文献書誌] Mizutani, T.et al.: "Maintenance of integrated proviral gene expression requires Brm, a catalytic subunit of SWI/SNF complex"J.Biol.Chem.. 277. 15859-15854 (2002)
[文献書誌] Shimizu, Y.et al.: "Kinetics of v-src-induced epithelial -mesenchymal transition in developing glandular stomach"Oncogene. (in press). (2003)
[文献書誌] Kameda, T.et al.: "Analysis of the cellular heterogeneity in the basal layer of mouse ear epidermis : an approach from partical decomposition in vitro and retroviral cell marking in vivo"Exp Cell.Res.. (in press). (2003)
[文献書誌] Yamamichi-Nishina, M.et al.: "SW1 3 cells can transition between two distinct subtypes by switching expression of BRG1 and Brm genes at the post-transcriptional level"J.Biol.Chem.. (in press). (2003)
[文献書誌] Iba, H.et al.: "SWI/SNF chromatin remodeling complex and retroviral gene silencing"Reviews in Medical Virology. (in press). (2003)

2002 年度 実績報告書

癌抑制遺伝子を長期間高レベルで発現する新規レトロウイルスベクターとその産生系

研究代表者

伊庭 英夫 東京大学, 医科学研究所, 教授 (60111449)

研究成果

[文献書誌] Koike, C.et al.: "Introduction of wild-type patched gene suppresses the oncogenic potential of human squamous cell"Oncogene. 21. 2670-2678 (2002)

[文献書誌] Mizutani, T.et al.: "Maintenance of integrated proviral gene expression requires Brm, a catalytic subunit of SWI/SNF complex"J.Biol.Chem.. 277. 15859-15854 (2002)

[文献書誌] Shimizu, Y.et al.: "Kinetics of v-src-induced epithelial -mesenchymal transition in developing glandular stomach"Oncogene. (in press). (2003)

[文献書誌] Kameda, T.et al.: "Analysis of the cellular heterogeneity in the basal layer of mouse ear epidermis : an approach from partical decomposition in vitro and retroviral cell marking in vivo"Exp Cell.Res.. (in press). (2003)

[文献書誌] Yamamichi-Nishina, M.et al.: "SW1 3 cells can transition between two distinct subtypes by switching expression of BRG1 and Brm genes at the post-transcriptional level"J.Biol.Chem.. (in press). (2003)

[文献書誌] Iba, H.et al.: "SWI/SNF chromatin remodeling complex and retroviral gene silencing"Reviews in Medical Virology. (in press). (2003)

2002 年度実績報告書

伊庭英夫東京大学, 医科学研究所, 教授 (60111449)