腎臓チャネル病の細胞内病態に基づく治療戦略の研究

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13307030
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 佐々木 成 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (60170677)
• キーワード: 水チャネル / アクアポリン / クロライドチャネル / チャネル病 / 細胞内小胞 / ノックアウトマウス

研究概要

1.AQP2に関しては、優性遺伝型式の発症を起こすC末側のフレームシフト変異の細胞内メカニズムの検討を進めた。野生型と変異型を永続的に発現するMDCK細胞株を樹立し、これを透過性のある膜上に上皮状に培養した。cAMPの刺激によって野生型AQP2は細胞内小胞から管腔膜へ移行するが、変異型はcAMPの有無にかかわらず側底膜に存在していることを共焦点顕微鏡ならびに免疫電顕で確認した。変異部分を幾つかに分割して発現実験を行ないC未側最後の数残基が大切であることも判明している。またこの現象をinvivoで再現するためにこの変異遺伝子のトランスジェニックマウスを作成したところ最大尿濃縮力が2/3に低下していることが判明した。このマウスのAQP2の免疫染色を行なっている。
2.AQP2のC末側に付着する蛋臼のクローニングに成功し、その蛋白はPDZ蛋臼であることが分かり、現在これのノックアウトマウスを作成し、尿濃縮力を調べている。
3.CLC-3のノックアウトマウスについて検討を進め、ヒトneuronal ceroid lipofuscinosisに近似しており、ライソソーム内にミトコンドリアFlFOATPaseサブユニットCが蓄積、エンドソームのpH上昇を確認した。これらのデーターはCLC-3が細胞内小胞のクロライドチャネルとして働いていることを示している。
4.BarrtinとCLC-K2の共発現培養細胞系を確立し、機能の相関を調べた。BarrtinはCLC-K2に結合し、細胞膜表面への輸送にかかわっていることが明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Isibashi K et al.: "Cloving and identification of a new member of water chanenel (AQP10) as an aquagly ceroporin"Biochim Biophys Acta. 1576. 335-340 (2002)
• [文献書誌] Kobayashi K et al.: "Human CLC-KB gene promoter drives the EGFP expression in the specific distal uephron segments and inner ear"Jam Soc Nephrol. 13(8). 1992-1998 (2002)
• [文献書誌] Lin S-H et al.: "Two novel aquapolin-2hutations responsible for Congenital uephrogenic diabetes insipidus in Chinese families"J Clin Endocvinol Metab. 87. 2694-2700 (2002)
• [文献書誌] Lin W et al.: "Analysis of Nacl transport in thin asconding limb of Henle's loop in CLC-Kl null mice"Am J Physiol Renal Physiol. 282(3). F451-F457 (2002)
• [文献書誌] Miyazaki H et al.: "Kidney-specific chloride channel, Om-ClC-K, predominantly expressed in the diluting segment of freshwater-adapted tilapia kidney"Proc Nutl Acad Sci USA. 99(24). 15782-15787 (2002)
• [文献書誌] Okado T et al.: "Sinad 7 mediatesctransforming growth factor-betuinduced apoptosis in luesaugialcells"Kidney Internatinal. 62. 1178-1186 (2002)
• [文献書誌] Ota T et al.: "Expression of aquapolin-l in the perironeal tissues : localization and regulation by hyperosmolality"Perit Dial Int. 22. 307-315 (2002)
• [文献書誌] Terada T et al.: "Gene transfer and expression of SMAD7 uxring adenovirus combined with in vivo electroporation in unilateral ureteral obstruction in rats"Kidney International. 1. S94-S98 (2002)
• [文献書誌] Yoshikawa M et al.: "CLC-3 deficienoy leads to prenetypes similar to human neutronal ceroid lipofuscinosis"Genes Cells. 7(6). 597-605 (2002)