ウマバベシア病に対する国際標準診断法の開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13356007
• 研究機関: 帯広畜産大学
• 研究代表者: 五十嵐 郁男 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (80159582)
• 研究分担者: 横山 直明 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 講師 (80301802) ; 玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10292096) ; 藤崎 幸蔵 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (00292095) ; 筏井 宏美 北里大学, 獣医畜産学部, 助手 (80327460) ; 井上 昇 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 講師 (10271751)
• キーワード: Babesia equi / Babesia caballi / 血清診断 / リコンビナント抗原 / ELISA / 金コロイド粒子 / ディップスティック法 / 国際標準診断法

研究概要

1.ウマバベシア原虫組換え抗原産生の検討
B.equiのメロゾイト表面抗原(EMA-2)およびB.caballiのロプトリー抗原の組み換え抗原(BC48)を大腸菌に効率良く高い濃度の蛋白質として産生させ、発現された原虫タンパク質をELISA用抗原としての有用性を実験感染馬の血清を用いて検討した結果、高い特異性および感度が認められた。
2.B.caballi原虫の新規の抗原
B.caballi原虫DNAを分離し、感染ウマから得られた血清を用いたクローニングにより、新規の遺伝子Bc134が得られた。大腸菌で発現させ、診断用抗原としての有用性をELISAを用いて検討した。その結果、B.equiと若干交差反応が認められるものの、診断抗原として使用できる可能性が示された。
3.ディップスティック法の基礎的検討
高濃度に発現されたB.equiのメロゾイト表面抗原(EMA-2)およびB.caballiのロプトリー抗原の組み換え抗原(BC48)を用いて、金コロイド粒子に結合させる蛋白質濃度、pH、金庫ロイド粒子の大きさ等の条件設定について検討した結果、特異的反応が高く、短時間で判定可能なディップスティック法の試作診断キットを作製した。現在、論文を投稿中であり、更に世界各地域から集めた血清を用いて野外で実用化について検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Huang X, Xuan X, Yokoyama N, Xu L, Suzuki H, Sugimoto C, Nagasawa H, et al.: "High-Level Expression and Purification of a Truncated Merozoite Antigen-2 of Babesia equi in Escherichia coli and Its Potential for Immunodiagnosis"J Clin Microbiol.. 41(3). 1147-1151 (2003)
• [文献書誌] Hirata H, Xuan X, Yokoyama N, Nishikawa Y, Fujisaki K, Suzuki N, Igarashi I.: "Identification of a Specific Antigenic Region of the p82 Protein of Babesia equi and Its Potential Use in Serodiagnosis"J Clin Microbiol.. 41(2). 547-551 (2003)
• [文献書誌] Nagai A, Yokoyama N, Matsuo T, Bork S, Hirata H, Xuan X, Zhu Y, Claveria FG, et al.: "Growth-Inhibitory Effects of Artesunate, Pyrimethamine, and Pamaquine against Babesia equi and Babesia caballi in In Vitro Cultures"Antimicrob Agents Chemother.. 47(2). 800-803 (2003)
• [文献書誌] Yokoyama N, Bork S, Nishisaka M, Hirata H, Matsuo T, Inoue N, Xuan et al.: "Roles of the Maltese cross form in the development of parasitemia and protection against Babesia microti infection in mice"Infect Immun.. 71(1). 411-417 (2003)
• [文献書誌] Boonchit S, Xuan X, Yokoyama N, Goff WL, Wagner G, Igarashi I.: "Evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay with recombinant rhoptry-associated protein 1 antigen against Babesia bovis for the detection of specific antibodies in cattle"J.Clin.Micorbiol.. 40(10). 3771-3775 (2002)
• [文献書誌] Hirata, H., Ikadai, H., Yokoyama, N., Xuan, X., Fujisaki, K., et al.: "Cloning of a truncated Babesia equi gene encoding a 82-kilodalton protein and its potential use in an enzyme-linked immunosorbent assay"J.Clin.Micorbiol.. 40(4). 1470-1474 (2002)