アンドロゲン受容体AF-1特異的コアクチベーター遺伝子のクローニングと創薬の開発

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13357010
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 名和田 新 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (10038820)
• 研究分担者: 岡部 泰二郎 九州大学, 医学部・附属病院, 助手 (40264030) ; 後藤 公宣 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (90284512) ; 柳瀬 敏彦 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (30239818) ; 高柳 涼一 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (30154917) ; 戸村 有宏 日本化薬株式会社, 医薬事業本部・創薬本部新薬創生部門, 研究員
• キーワード: Yeast two-hybrid assay / ARAF-1 / GSTプルダウン / cDNA cloning / TPR

研究概要

我々は,平成10,11年度で,アンドロゲン受容体のAF-1蛋白質を用いたGST-pull-down実験でアンドロゲン受容体共役因子異常症患者者で特異的に欠損する90kDaの蛋白質を同定した。
平成13年度はこの90kDaタンパク質をクローニングする目的で,アンドロゲン受容体AF-1をbaitとして,酵母Two-Hybridシステムを用いてスクリーニングした結果,941アミノ酸からなる既知のタンパク質を得た。このタンパク質はその分子内にTPR(Tetratrico Peptide Repeat)モチーフを19回反復するという特徴を有するため仮にTPRタンパク質と名付けている。このタンパク質は,レポーターアッセイでアンドロゲン受容体の転写活性化能を3〜5倍増加させ,GST pulldown assayでアンドロゲン受容体AF-1領域に直接結合することが判明しているが,エストロゲン受容体の転写活性化能は増加させない。
このTPRcDNA, ARcDNA,リポーター遺伝子としてMMTVを細胞に発現し,転写発現を抑制する低分子化合物を選択中である。

研究成果

• [文献書誌] Saitoh M, Yanase T, Morinaga H, Tanabe M, Mu YM, Nishi Y, Nomura M, Okabe T, Goto K, Tkayanagi R, Nawata H.: "Tributyltin or Triphenyltin Inhibits Aromatase Activity in the Human Granulosa-like Tumor Cell Line KGN"Biochem Biophys Res Commun.. 289. 198-204 (2001)
• [文献書誌] Nishi Y, Yanase T.Mu Y, Oba K, Ichino I, Saito M, Nomura M, Mukasa C, Okabe T, Goto K., Takayanagi R, Kashimura Y, Haji M, Nawata H.: "Establishment and characterization of a steroidogenic human granulosa-like tumor cell line, KGN that expresses functional FSH receptor"Endocrinology. 142. 437-445 (2001)
• [文献書誌] Yanase T, Mu YM, Nishi Y, Goto K, Nomura M. Okabe T, Tkayanagi R, Nawata H.: "Regulation of aromatase by nuclear receptors"J Steroid Biochem Mol Biol.. 79. 187-192 (2001)
• [文献書誌] Mu Y, Yanase T, Nishi Y, Saito M, Nomura M, Mukasa C, Okabe T, Goto K, Nawata H.: "Saturated free fatty acids, palmitic acid and stearic acid induces apoptosis of human granulosa cells"Endocrinology. 142. 3590-3597 (2001)
• [文献書誌] Tomura A, Goto K, Morinaga H, Nomura M., Okabe T, Yanase T, Takayanagi R, Nawata H.: "The subnuclear three-dimensional image analysis of androgen receptor fused to fluorescence protein"J Biol Chem. 276. 28395-28401 (2001)
• [文献書誌] Mu YM, Yanase T, Nishi Y, Takayaagi R, Goto K, Nawata H.: "Nuclear receptor constituted by PPARg : RXR heterodimers inhibits the expression of cytochrome p450 in human granulosa cells"Mol Cell Endocrinol. 181. 239-248 (2001)