ゼノマウス応用による歯科疾患受動免疫療法用ヒト型抗体の作製

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13357017
• 研究機関: 日本大学
• 研究代表者: 安孫子 宜光 日本大学, 松戸歯学部, 教授 (70050086)
• 研究分担者: 岸川 道子 (木山 道子) 日本大学, 松戸歯学部, 助手 (50256905) ; 柴田 恭子 日本大学, 松戸歯学部, 講師 (90133438) ; 斉藤 重野 日本大学, 松戸歯学部, 講師 (60072394)
• キーワード: Porphyromonas gingivalis / Xeno mouse / transchromo-mouse / 赤血球凝集因子 / 歯周病病原因子 / ヘミン結合活性 / ヒト型抗体

研究概要

歯周病原菌P.gingivalisの定着に関与する40-kDa外膜タンパク質、130-kDa赤血球凝集因子、200-kDa膜関連タンパク質の遺伝子をクローニングし、これら病原因子活性を中和する安全な受動免疫抗体としてヒト抗体遺伝子をもつトランスジェニックマウスを用い、病原因子機能を中和する受動免疫療法用抗体として、ヒト型抗体の作成を試みた。
ヒト抗体遺伝子をもつトランスジェニックマウス(Xeno mouse, Transchromo-mouse)にそれぞれ130-kDa赤血球凝集因子、40-kDa外膜タンパク質遺伝子を免疫し、病原因子活性を阻害するヒト型抗体を作成した。40-kDa外膜タンパク質遺伝子、200-kDa膜関連タンパク質遺伝子の塩基配列を解読し分子解析を行なった。さらに200-kDa膜関連タンパク質遺伝子のサブクローニングを行い組換えタンパク質の量産を試みた。
Xeno mouseハイブリドーマで得られたヒト型抗体は、濃度依存的にP.gingivalisの赤血球凝集活性を阻害した。40-kDa外膜タンパク質遺伝子の解析の結果、ヘミン結合タンパク質であることが示唆され、Transchromo-mouseハイブリドーマで得られたヒト型抗体は共凝集活性、ヘミン結合活性を阻害し、また、好中球の貪食作用を活性化した。組換え40-kDa外膜タンパク質のポリマーは赤血球凝集活性をもち、組換えタンパク質に対する抗体が赤血球凝集活性を阻害した。200-kDa膜関連タンパク質遺伝子塩基配列のデータベース検索によって、P.gingivalisの赤血球凝集因子の一つであるHagA遺伝子であることが判明した。サブクローン遺伝子産物を精製し抗血清を作成したところ赤血球凝集活性を阻害した。これらの結果から、さらにP.gingivalisの病原因子の分子標的を明確にした有効な免疫療法の開発が期待できる。

研究成果

• [文献書誌] Shioza, T.et al.: "Production of a single-chain variable fraction capable of inhibiting the Streptococcus mutansglucosyltransferase in Bacillus brevis : Construction of a chimeric shuttle plasmid secretings its gene product"Biochimica Biophysica Acta. 1626. 57-64 (2003)
• [文献書誌] Tsurumi, Y.et al.: "Production of antibody against a synthetic peptide of Porphyromonas gingivalis 40-kDa outermembrane protein"Journal of Oral Science. 78(2). 111-116 (2003)
• [文献書誌] Teshirogi, K.et al.: "Production of monoclonal antibody inhibiting dipeptidylaminopeptidase IV activity of Porphyromonas gingivalis"Hybridoma and Hybridomics. 22(3). 147-151 (2003)
• [文献書誌] Ema, M.et al.: "Characterization of the gene encoding 200-kDa Porphyromonas gingivalis protein that react to sera from periodontitis patients"Journal of Oral Science. 45(3). 145-152 (2003)
• [文献書誌] Yamada, K., et al.: "Identification of the functional domain in a coaggregation factor from Porphyromonas gingivalis"International Journal of Oral-Med Sciences. 1(2). 97-102 (2003)
• [文献書誌] Abiko, Y.et al.: "Analysis of functional domains of Streptococcus sobrinus glucosyltransferase"International Journal of Oral-Med Sciences. 1(2). 152-156 (2003)
• [文献書誌] Kaizuka K et al.: "Human Monoclonal Antibody Inhibit Porphyromonas gingivalis Hemagglutinin Activity"Journal of Periodontology. 74. 38-43 (2003)
• [文献書誌] Shibata Y: "A 35-kDa co-aggregation factor as a hemin binding protein in Porphyromonas gingivalis"Biochemical Biophysical Research Communication. 300. 351-356 (2003)
• [文献書誌] 安孫子宜光他: "歯周病のストラテジー、第3編 11章 歯周病の遺伝子診断"医歯薬出版. 395 (2003)