| 研究課題/領域番号 |
13460013
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
園芸・造園学
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
山木 昭平 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (70210341)
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| 研究分担者 |
白武 勝裕 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助教授 (90303586)
森 仁志 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (20220014)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| キーワード | cDNAライブラリー / 遺伝子のクローニング / 受粉 / 結実 / ナス果実 / ピーマン果実 / サブトラクション / 単為結果 |
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| 研究概要 |
ナスの開花後受粉すると花粉管は伸長し、1.5〜2日で子房に到達し受精することを蛍光顕微鏡で明らかにした。それ故、実験区として開花時に除雄し、受粉区、非受粉区、非受粉+オーキシン処理区を設け、2日あるいは3日間生長させた後RNAを抽出した。まず、開花後2日目の受粉果実と無受粉果実の間でサブトラクションを行い、Subtracted cDNAライブラリーを作製した。その中の384個のcDNAクローンをランダムにピックアップ後、ナイロンメンブレンにスポットし、cDNAマクロアレイ解析を行った。その結果、開花後2日目の受粉果実が開花後2日目の無受粉果実でのシグナルより強い遺伝子が32個存在した。それらのcDNAをプローブとしてノーザン解析を行ったところ、開花後2日目の受粉果実が無受粉果実より高い発現の遺伝子が11個存在した。それらのうちシトクロムP450、Unknown protein、Hypothetical proteinと相同性のある3個の遺伝子は、受粉果実およびオーキシンを処理した単為結果果実の結実の極めて初期である、開花後2から4日目で顕著に発現しその後低下した。一方、3日目では特異的に発現する10種類のcDNAクローンを得た。そこにはヒストン、カルレティキュリン、ポリフェノール酸化酵素、細胞壁構成タンパク質、細胞分裂関連タンパク質、分子シャペロンが含まれた。しかし、いずれも3日目以降も強い発現を示した。以上より、2日目で顕著に発現した3つの遺伝子は結実の初発に関連する可能性が示唆された。
またピーマン果実においても、ナスと同様の方法を用いて受粉により特異的に発現する遺伝子を選抜したところ、受粉後2日間生長させたピーマン子房より7個のEST遺伝子を単離した。ノーザンブロット解析によりEmbryomic flower 2という花成の制御に関与する遺伝子が受粉により顕著に発現することを明らかにした。
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