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2002 年度 研究成果報告書概要

タバコモザイクウイルスRNA複製機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 13460018
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 植物保護
研究機関北海道大学

研究代表者

石川 雅之  北海道大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (70192482)

研究分担者 内藤 哲  北海道大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20164105)
研究期間 (年度) 2001 – 2002
キーワードタバコモザイクウイルス / RNA複製 / 宿主因子 / シロイヌナズナ
研究概要

シロイヌナズナのTOM1およびTOM2A遺伝子は、タバコモザイクウイルス(TMV)の増殖に必須な宿主遺伝子として遺伝学的に同定された。本研究では、これらがTMVの複製過程でどのように機能するのかを知るために以下の二点を検討した。(1)TOM1,TOM2A蛋白質の細胞内局在性:TOM1あるいはTOM2A蛋白質とgreen fluorescent protein (GFP)の融合蛋白質を発現するタバコBY-2培養細胞形質転換体を作製した。これらの細胞を蛍光顕微鏡で観察したところ、いずれにおいても主として液胞膜にGFPシグナルが観察された。また、イオディキサノール密度勾配遠心を用いた細胞分画法により、観察されたGFPシグナルが内在性のTOM1あるいはTOM2Aの細胞内局在を反映すること、GFP-TOM2A(TOM2A)およびTOM1-GFP(TOM1)は液胞膜に富む低浮遊密度画分に分画されることを明らかにした。TOM1-GFP(TOM1)は液胞膜画分とともに、より高密度の画分にも見いだされた。さらに、TMVの2本鎖RNA合成活性の分画パターンはTOM1のものと酷似していた。TMVの複製蛋白質は膜の存在しない画分にも多量に存在したが、そこにはRNA合成活性は検出されなかった。(2)TOM1,TOM2A蛋白質の相互作用:酵母two hybrid systemの一種で、膜蛋白質同士の相互作用の有無を検討できるsplit ubiquitin systemを用いてTOM1とTOM2Aが相互作用するか検討した。その結果、TOM2AはTOM1ともTOM2A自身とも相互作用しうることが明らかになった。前述の細胞内局在性の結果とあわせ、TMVの複製複合体はTOM1の存在する膜上で形成されるが、さらにTOM2Aが共存すると複製複合体形成が効率よく起こる可能性が示唆された。

  • 研究成果

    (8件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (8件)

  • [文献書誌] Takuya Yamanaka: "Complete inhibition of tobamovirus multiplication by simultaneous mutations in two homologous host genes"J.Virol.. 76・5. 2491-2497 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yayoi Tsujimoto: "Arabidopsis TOBAMOVIRUS MULTIPLICATION (TOM) 2 locus encodes a transmembrane protein that interacts with TOM1"EMBO J.. 22・2. 335-343 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yuka Hagiwara: "Subcellular localization of host and viral proteins associated with tobamovirus RNA replication"EMBO J.. 22・2. 344-353 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Yuriko Tomita: "Mutation of host dnaJ homolog inhibits negative-strand RNA synthesis of brome mosaic virus"J.Virol.. 77・5. 2990-2997 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [文献書誌] Takuya Yamanaka: "Complete inhibition of tobamovirus multiplication by simultaneous mutations in two homologous host genes"J. Virol.. 76-5. 2491-2497 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yayoi Tsujimoto: "Arabidopsis TOBAMOVIRUS MULTIPLICATION (TOM) 2 locus encodes a transmembrane protein that interacts with TOM1"EMBO J.. 22-2. 335-343 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yuka Hagiwara: "Subcellular localization of host and viral proteins associated with tobamovirus RNA replicaton"EMBO J.. 22-2. 344-353 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [文献書誌] Yuriko Tomita: "Mutation of host dnaJ homolog inhibits negative-strand RNA systhesis of brome mosaic virus"J. Virol.. 77-5. 2990-2997 (2003)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2004-04-14  

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